[發(fā)明專利]一種檢測轉基因玉米MIR604的引物、探針及試劑盒和方法

在審

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• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN109161585A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設計）人: 陳笑蕓;徐俊鋒;汪小福;彭城;徐曉麗;魏巍
• 申請（專利權）人: 浙江省農業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種轉基因玉米MIR604的RPA檢測引物，其特征在于，所述的引物包括正向引物F和反向引物R，所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.權利要求1所述的RPA檢測引物在檢測轉基因玉米MIR604種質資源中的應用。

3.一種RPA檢測轉基因玉米MIR604種質資源的探針，其特征在于，所述的探針與權利要求1所述的引物配合使用，所述的探針核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一種轉基因玉米MIR604的RPA檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的正向引物F和反向引物R。

5.根據權利要求4所述的一種轉基因玉米MIR604的RPA檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求3所述的探針。

6.一種轉基因玉米MIR604的RPA檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測樣品的基因組DNA；

2)配制待測樣品的RPA檢測反應體系：在200μL PCR反應管內加入模板DNA2μL、檢測正反引物溶液各1μL、探針溶液0.5μL、BufferA溶液23.5μL、BufferB溶液2μL，總體積為30μL；

3)運行RPA擴增與結果判斷：將PCR反應管置于熒光檢測儀中，37～42℃孵育20min，根據熒光曲線擴增的有無，實時分析擴增結果。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述的正反引物和探針溶液的濃度為10μmol/L。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述的Buffer A包含：50mmol/LTris-HCl、pH 8.4，80mmol/L KAc，2mmol/L DTT，3mmol/L ATP，200μmol/L dNTPs，20mmol/LC₄H₁₀N₃O₅P，100ng/μL creatine kinase，5％20mol/L PEG，600ng/μL SSB，125ng/μL uvsX，25ng/μL uvxY，30ng/μL Bsu和96ng/μL ExoⅢ。

9.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述的Buffer B為10mmol/L MgAc。