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[發明專利]一種檢測血清/血漿中肌酸激酶同工酶的化學發光定量檢測試劑盒及其制備方法在審

專利信息
申請號: 201811221765.2 申請日: 2018-10-19
公開(公告)號: CN109490549A 公開(公告)日: 2019-03-19
發明(設計)人: 王立英;韓美玉;高威;孫成艷;何浩會 申請(專利權)人: 迪瑞醫療科技股份有限公司
主分類號: G01N33/68 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N21/76
代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214 代理人: 張偉
地址: 130103 吉林*** 國省代碼: 吉林;22
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 肌酸激酶同工酶 化學發光 定量檢測試劑盒 血清 血漿 種檢測 校準品 質控品 吖啶酯 抗體 制備 鏈霉親和素包被 免疫分析技術 雙抗體夾心法 檢測靈敏度 生物素標記 試劑成本 磁微粒 親和素 生物素 試劑盒 檢測
【說明書】:

發明屬于免疫分析技術領域,具體涉及一種檢測血清/血漿中肌酸激酶同工酶的化學發光定量檢測試劑盒及其制備方法。本發明的檢測血清/血漿中肌酸激酶同工酶的化學發光定量檢測試劑盒,包括:1)鏈霉親和素包被的磁微粒;2)生物素標記的肌酸激酶同工酶抗體;3)吖啶酯標記的肌酸激酶同工酶抗體;4)校準品與質控品;所述校準品與質控品各含高、低兩個濃度點。本發明提供的一種檢測血清/血漿中肌酸激酶同工酶的化學發光定量檢測試劑盒,采用雙抗體夾心法的原理,同時利用親和素?生物素體系,采用吖啶酯化學發光,大大提高了試劑盒的檢測靈敏度,減少反應時間,降低試劑成本。

技術領域

本發明屬于免疫分析技術領域,具體涉及一種檢測血清/血漿中肌酸激酶同工酶的化學發光定量檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

肌酸激酶CK是由兩個亞基組成的二聚體,分別由位于14和19號染色體不同基因編碼的M和B兩個亞基構成,可以組成3種同工酶,分別為CKMM、 CKMB和CKBB,其中混合單體的肌酸激酶同工酶主要來源于心肌(心肌中CK-MB占CK總量的15%~25%)。這三種同工酶分子量相同,催化相同的化學反應,但其分子結構和來源不同。

肌酸激酶CK是一個大的二聚體蛋白質,其中M亞基具有一個小的N-末端結構和一個大的C-末端結構;M型亞基由387個氨基酸殘基組成,分子量為 43kDa左右,分子內有8個巰基,但無二硫鍵。天然的肌酸激酶是一個緊密的球狀結構,近來關于肌酸激酶構象變化和活力變化關系的研究顯示了酶分子活性部位構象的柔性,即酶分子活性部位的微區構象在變性劑作用下易發生改變而導致酶分子快速失活,此時酶分子整體構象尚未發生明顯變化。

血清中CK-MB含量的測定可以輔助診斷心肌損傷。心肌梗塞(AMI)并伴有胸痛的患者,心肌損傷發作3~8小時后出現CK-MB含量升高,12~24h時達到高峰濃度,24~48h內通常恢復到基準水平。這種上升而后迅速下降的模式是表現心肌梗塞的典型模式,但在某些情況下,心肌梗塞可能作為并發癥出現,因此監測病人的CK-MB水平有助于早期發現心肌梗塞情況。

除心肌梗塞外,冠狀動脈旁路手術、瓣膜替換術或先天性缺損修復術等心臟手術也可能導致血清中CK-MB含量升高,但不表現出心肌梗塞的典型模式。骨骼肌損傷、皮肌炎、雷依氏綜合征、橫紋肌損傷或慢性酒精中毒等情況也可能導致血清中CK-MB含量升高。

目前用于檢測肌酸激酶同工酶的免疫分析方法主要有酶聯免疫分析法和化學發光免疫分析法。酶聯免疫分析法采用堿性磷酸酶標記抗體,用于催化發光底物產生顏色變化,具有操作簡單,試劑穩定性長等特點,但試劑的檢測靈敏度較低。化學發光免疫分析法采用催化劑催化化學發光物質形成一種激發態中間體,當激發態中間體回到穩定的基態時,發出光子,具有操作簡單,自動化程度高,檢測速度快等優點。

目前市售的肌酸激酶同工酶檢測試劑盒主要分為以下2種:一是Elisa方法即辣根過氧化物酶或者堿性磷酸酶標記一株肌酸激酶同工酶抗體,固相載體(微孔板或固相微粒)包被另一株肌酸激酶同工酶抗體,利用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶催化發光底物產生顏色變化,檢測血清或血漿中肌酸激酶同工酶的濃度;二是三聯吡啶釕電化學發光法,采用鏈霉親和素磁珠,一株肌酸激酶同工酶抗體標記生物素,另一株肌酸激酶同工酶抗體標記三聯吡啶釕,經過免疫反應形成磁珠-鏈霉親和素-生物素-肌酸激酶同工酶抗體-肌酸激酶同工酶-肌酸激酶同工酶抗體-三聯吡啶釕復合物,在電場加壓條件下發光。

以上定量檢測肌酸激酶同工酶的方法存在以下缺陷:1)ELISA方法采用微孔板作為固定性,包被密度有限,靈敏度較低,反應時間較長;2)采用三聯吡啶釕的電化學發光法,儀器要求較高,試劑及儀器昂貴。

發明內容

本發明要解決現有技術中的技術問題,提供一種檢測血清/血漿中肌酸激酶同工酶的化學發光定量檢測試劑盒及其制備方法。

為了解決上述技術問題,本發明的技術方案具體如下:

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