[發明專利]一種叢枝菌根真菌的簡易保存方法在審
| 申請號： | 201811221229.2 | 申請日： | 2018-10-19 |
| 公開（公告）號： | CN109207367A | 公開（公告）日： | 2019-01-15 |
| 發明（設計）人： | 孫錦;孔鐳;劉銘銘;王戰;宮筱雯;張曉琳;楊雅蘭 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12N1/04 | 分類號： | C12N1/04;C12N3/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 韓正玉;徐冬濤 |
| 地址： | 210043 江蘇省南京市棲霞區八卦洲街道江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 叢枝菌根真菌 保存 離心管 孢子懸浮液 甘油 蔗糖 裝入 簡易 微生物保存技術 冷凍保護劑 寄主植物 菌種活性 生理鹽水 盆栽 共生體 海藻糖 混合液 離心法 自封袋 孢子 根系 硅膠 菌根 菌劑 擴繁 傾析 濕篩 預凍 成功 | ||
1.一種叢枝菌根真菌的保存方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：
(1)制備叢枝菌根真菌孢子懸浮液；
(2)配制冷凍保護液，滅菌后將冷凍保護液與上述孢子懸浮液均勻混合；
(3)將混合液裝入離心管中，再將離心管裝入自封袋中并利用硅膠進行干燥；
(4)將離心管置于-20℃下預凍，最后置于-80℃下進行保存，使用時在水浴鍋中進行解凍。
2.如權利要求1所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步驟(1)中所述的叢枝菌根真菌孢子懸浮液是通過以下步驟制備：
S1：將叢枝菌根真菌進行盆栽培養，3個月后收獲地下部分，置于陰涼處自然風干，得到叢枝菌根真菌擴繁菌劑；
S2：采用濕篩傾析法和蔗糖離心法從盆栽擴繁菌劑中分離得到叢枝菌根真菌孢子懸浮液。
3.如權利要求1所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步驟(1)中所述的叢枝菌根真菌孢子懸浮液的濃度為30～200個/ml。
4.如權利要求1所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步驟(2)中所述的冷凍保護液為甘油的水溶液、甘油的水溶液和生理鹽水的混合溶液、海藻糖溶液或蔗糖溶液。
5.如權利要求4所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步驟(2)中甘油的水溶液中甘油的質量濃度為40～60％、生理鹽水的質量濃度為0.5～1.5％，所述的混合溶液中甘油的水溶液和生理鹽水混合的體積比為8：2、海藻糖溶液的濃度為0.2mol/L～0.5mol/L、蔗糖溶液的質量濃度為40～60％。
6.如權利要求4所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：所述叢枝菌根真菌孢子懸浮液與冷凍保護液的混合比例為1：1～3。
7.如權利要求4所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步驟(2)中，所述滅菌在溫度121℃，相對壓力為0.12MPa條件下蒸汽滅菌10～30min。
8.如權利要求1所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于在步驟(3)中，所述干燥時間為24～48h。
9.如權利要求1所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于在步驟(4)中，所述預凍時間為12～24h；解凍的溫度為30～40℃。
10.如權利要求1所述的叢枝菌根真菌保存方法，其特征在于：所述的叢枝菌根真菌為根內球囊霉或摩西球囊霉。
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