[發明專利]一種生產乳酸和3-羥基丁酸共聚酯的基因工程菌及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 201811219689.1 | 申請日： | 2018-10-19 |
| 公開（公告）號： | CN109295085A | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 李正軍;史理隴;笪央央;普楠 | 申請（專利權）人： | 北京化工大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12P7/56;C12P7/62;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;魏少偉 |
| 地址： | 100029 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 羥基丁酸 乳酸 共聚酯 基因工程菌 葡萄糖 受體菌 構建 基因 基因編碼蛋白質 乙酸 應用 工程菌株 搖瓶培養 乙酸合成 聚合物 重組菌 敲除 生產 | ||
1.重組菌的構建方法，包括對受體菌進行下述A1-A7的改造，得到所述重組菌；
A1、敲除所述受體菌的poxB基因或抑制所述poxB基因的表達或抑制所述poxB基因編碼的蛋白質的活性；
A2、敲除所述受體菌的pflB基因或抑制所述pflB基因的表達或抑制所述pflB基因編碼的蛋白質的活性；
A3、敲除所述受體菌的aceEF基因或抑制所述aceEF基因的表達或抑制所述aceEF基因編碼的蛋白質的活性；
A4、增加所述受體菌中phaA基因編碼蛋白質的含量或增強所述phaA基因編碼蛋白質的活性；
A5、增加所述受體菌中phaB基因編碼蛋白質的含量或增強所述phaB基因編碼蛋白質的活性；
A6、增加所述受體菌中phaC基因編碼蛋白質的含量或增強所述phaC基因編碼蛋白質的活性；
A7、增加所述受體菌中pct基因編碼蛋白質的含量或增強所述pct基因編碼蛋白質的活性；
所述受體菌為含有所述poxB基因、所述pflB基因和所述aceEF基因的細菌或真菌。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述受體菌為1)或2)或3)：
1)大腸桿菌；
2)大腸桿菌MG1655；
3)大腸桿菌JM109。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述phaA基因編碼蛋白質為下述a1)或a2)的蛋白質：
a1)序列表中序列8所示的蛋白質；
a2)將序列表中序列8的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；
和/或，所述phaB基因編碼蛋白質為下述b1)或b2)的蛋白質：
b1)序列表中序列9所示的蛋白質；
b2)將序列表中序列9的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；
和/或，所述phaC基因編碼蛋白質為下述c1)或c2)的蛋白質：
c1)序列表中序列10所示的蛋白質；
c2)將序列表中序列10的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；
和/或，所述pct基因編碼蛋白質為下述d1)或d2)的蛋白質：
d1)序列表中序列11所示的蛋白質；
d2)將序列表中序列11的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質。
4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
A1通過向所述受體菌中導入含有所述poxB基因上下游同源臂的DNA片段實現；
和/或，A2通過向所述受體菌中導入含有所述pflB基因上下游同源臂的DNA片段實現；
和/或，A3通過向所述受體菌中導入含有所述aceEF基因上下游同源臂的DNA片段實現；
和/或，A4通過向所述受體菌中導入含有所述phaA基因的phaA基因表達盒實現；
和/或，A5通過向所述受體菌中導入含有所述phaB基因的phaB基因表達盒實現；
和/或，A6通過向所述受體菌中導入含有所述phaC基因的phaC基因表達盒實現；
和/或，A7通過向所述受體菌中導入含有所述pct基因的pct基因表達盒實現。
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