[發明專利]一種貽貝來源的ACE抑制及抗腫瘤活性肽

有效

• 申請號: 201811214661.9
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109206483B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 包衛洋;左愛華;王祖哲;馬普;孫天利
• 申請（專利權）人: 大連深藍肽科技研發有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16;C12P21/06;A23L33/18;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 大連瑞博晟知識產權代理有限公司 21259
• 代理人: 楊迪

1.一種貽貝來源的ACE抑制及抗腫瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽其氨基酸序列為Arg-Tyr-Pro-Asp-Pro-Leu。

2.根據權利要求1所述的一種貽貝來源的ACE抑制及抗腫瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽具有ACE抑制活性及抗肝癌細胞增殖的活性，可應用于制備具有調節血壓及抗肝癌作用的藥物方面。

3.根據權利要求1所述的一種貽貝來源的ACE抑制及抗腫瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽的分離純化方法，包括以下步驟：

S1、貽貝酶解低聚肽的制備

貽貝樣品處理后，加入15~20倍質量體積的水制成勻漿液置于酶解罐中，然后加入貽貝質量的2~5%的復合蛋白酶，在40～50℃下酶解4小時，酶反應pH 值控制在8.0～9.0，酶解結束后升溫至80~90℃滅酶10分鐘，得到貽貝蛋白酶解液，將蛋白酶解液8000轉/分鐘離心10分鐘，去除顆粒狀物質，然后采用膜分離技術進行分離，截留分子量為3000 Da，過膜液噴霧干燥得貽貝小分子肽粉；所述復合蛋白酶的質量配比為：中性蛋白酶:木瓜蛋白酶:風味蛋白酶=（2~4）:（3~5）:（3~5）；

S2、小分子活性肽的分離純化

將S1中的小分子活性肽粗品加水溶解，配制成濃度為100 mg/mL的溶液，采用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜分進行分離純化，流動相為30%甲醇，流速為0.3 ～0.5 mL/min，洗脫液280 nm或220 nm測定吸光度，根據吸光度值收集所需峰；

采用高效液相色譜進一步純化，色譜條件如下：C18色譜柱，流動相A為含體積百分數0.05~0.1%三氟乙酸水，流動相B為乙腈，梯度洗脫條件為：0～15 min，3%B，15～20 min，3%～10%B，20～30 min，10%B～20%B，30～40 min，20%B～35%B，流速為1.0 mL/min，檢測波長為220或280 nm，收集保留時間在30分鐘的色譜峰，濃縮后冷凍干燥得小分子活性肽；

S3、純度及氨基酸序列測定

收集的小分子肽經液相色譜檢測為單一峰，利用高效液相色譜-質譜測定結構，其氨基酸序列為：Arg-Tyr-Pro-Asp-Pro-Leu，其分子量為760.39 Da。

4.根據權利要求3所述的一種貽貝來源的ACE抑制及抗腫瘤活性肽，其特征在于，所述步驟S2中的葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱內徑為3.0 cm，柱長100 cm。

5.根據權利要求3所述的一種貽貝來源的ACE抑制及抗腫瘤活性肽，其特征在于，所述C18色譜柱內徑為4.6 mm，柱長250 mm，粒度5μm。