[發明專利]植物內源性植物磺肽素含量的定量檢測方法

有效

• 申請號: 201811214573.9
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109374763B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 褚金芳;房爽;辛培勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;魏少偉

1.一種內源性植物磺肽素的檢測方法，包括：

1)向待測樣本中加入內標，將內標的添加量記為S0，得到所述待測樣本與所述內標的混合物；所述內標為將植物磺肽素中異亮氨酸殘基的原子進行如下a1)和a2)的改造得到的化合物：a1)將全部的¹²C替換為¹³C；a2)將¹⁴N替換為¹⁵N；

2)向所述混合物中添加提取溶劑，得到提取液；裂解所述提取液中細胞，得到裂解產物；所述提取溶劑為甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇的體積百分比為80％；所述提取溶劑的添加量滿足所述混合物中所述待測樣本與所述提取溶劑的配比為100mg:1mL；

利用弱陰離子交換-反相吸附混合模式的固相萃取柱富集純化所述裂解產物中的植物磺肽素和所述內標，得到含有植物磺肽素和所述內標的提取物；所述固相萃取柱為含有胺基基團的弱陰離子反相吸附劑的萃取柱；

其中，利用所述弱陰離子交換-反相吸附混合模式的固相萃取柱富集純化所述裂解產物中的植物磺肽素和所述內標時，先利用淋洗溶劑淋洗除雜，所述淋洗溶劑為80％甲醇水溶液和/或甲醇；再利用洗脫溶劑洗脫已吸附有植物磺肽素和所述內標的所述固相萃取柱，得到的洗脫液即為所述提取物；所述洗脫溶劑為5％氨水-50％甲醇，所述5％氨水-50％甲醇由水、氨水和甲醇組成，水、氨水和甲醇的體積比為30:20:50，所述氨水中氨的濃度為25％；

3)檢測所述提取物中的植物磺肽素和所述內標的含量，得到植物磺肽素和所述內標的測得值，將植物磺肽素和所述內標的測得值分別記為Pd和Sd；根據公式1計算所述待測樣本中植物磺肽素的含量：

所述待測樣本中植物磺肽素的含量＝Pd×S0/Sd公式1。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述待測樣本為植物的完整植株、器官、組織和/或細胞。

3.權利要求1或2所述方法在植物磺肽素定量分析中的應用。