[發明專利]一種提高酵母菌耐鹽能力的共培養方法

有效

• 申請號: 201811213777.0
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109266585B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 吳重德;姚尚杰;楊歡
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12R1/645;C12R1/01
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 黃燕

本發明公開了一種提高酵母菌耐鹽能力的共培養方法，屬于生物工程技術領域。本發明是將培養好的乳酸菌在培養基中前培養4?h后，再接入酵母菌進行共培養4?h，所獲得的菌體點種至含有12%NaCl的酵母菌固體平板上（含氯霉素），酵母菌生物量比未經共培養的細胞數有所提高。本發明方法簡單、便于操作，可用于酵母菌的發酵生產。

技術領域

本發明涉及一種提高酵母菌耐鹽能力的方法，屬于生物工程技術領域。

背景技術

魯氏酵母菌屬于酵母科中的接合酵母屬，是最常見的嗜高滲透壓酵母菌，又是傳統發酵重要的生產菌，廣泛存在于醬油、豆瓣等鹽漬食品中。魯氏酵母在醬油主發酵期發揮作用，主要產生乙醇、高級醇等風味物質，酵母中的谷氨酰胺酶能轉化底物生成谷氨酸而增強醬油的鮮味，對發酵調味品的風味起著積極作用。嗜鹽四聯球菌也是傳統發酵食品如醬油、果醬等發酵生產中的重要菌株，是產生揮發性物質的主要微生物之一，具有促進香味成分生成，改善產品品質和口感等功能。利用乳酸菌和酵母菌共培養不僅能縮短產品發酵周期，還能延長產品的貨架期，賦予產品潛在的益生性質。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用乳酸菌和酵母菌共培養提高酵母菌耐鹽能力的方法。

所述的共培養方法為在共培養系統中，先將乳酸菌經過前培養4h后，再加入酵母菌共同培養4?h。

菌株：魯氏酵母，保藏于CGMCC-中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC?NO.3791，保藏日期為2010年04月29日，分類命名為Zygosaccharomyces?rouxii?SZ-1；嗜鹽四聯球菌，保藏于CGMCC-中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC?NO.3792，保藏日期為2010年04月29日，分類命名為Tetragenococcus?haiophilus?SZ-B-2。

種子培養方法：乳酸菌培養基：10?g/L蛋白胨，8?g/L牛肉膏，4?g/L酵母粉，20?g/L葡萄糖，0.1%?山梨醇單油酸酯，2?g/L磷酸氫二鉀，5?g/L三水乙酸鈉，2?g/L檸檬酸三銨，0.2?g/L七水合硫酸鎂，0.2?g/L?四水合硫酸錳，6?%NaCl，pH為6.2；酵母菌培養基：10?g/L酵母粉，20?g/L蛋白胨，20?g/L葡萄糖，6?%NaCl，pH?為6.0。分別取-80℃保藏的1?mL乳酸菌和酵母菌甘油管儲存液接種于5?mL乳酸菌培養基和酵母菌培養基中，30℃靜置培養24?h，再分別轉接種到100?mL乳酸菌培養基和酵母菌培養基中，30℃靜置培養24?h。

前培養培養基：10?g/L蛋白胨，8?g/L牛肉膏，4?g/L酵母粉，20?g/L葡萄糖，0.1%山梨醇單油酸酯，2?g/L磷酸氫二鉀，5?g/L三水乙酸鈉，2?g/L檸檬酸三銨，0.2?g/L七水合硫酸鎂，0.2?g/L?四水合硫酸錳，6?%NaCl，pH6.2。

共培養方法：將培養好的乳酸菌培養液以10000?r/min（4℃）離心5?min收集菌體，將菌體重懸于30?mL前培養培養基中30℃靜置培養4?h，再將培養好的酵母菌種子液以10000?r/min（4℃）離心5?min收集菌體，并加入到前培養的培養基中共同培養4?h。

耐鹽能力的測定：取共培養結束后的菌懸液進行梯度稀釋，吸取一定量合適稀釋倍數下的菌懸液，接種到含有12?%NaCl酵母菌固體選擇培養基（加入0.01%氯霉素）上，30℃靜置培養后對菌落計數。

本發明的有益效果：本發明提供的將嗜鹽四聯球菌提前培養4?h，再與魯氏酵母共同培養4?h后，魯氏酵母在高鹽（12?%NaCl）脅迫條件下，比對照組（未經過共同培養處理）具有更好的生長性能。本發明提供一種基于乳酸菌和酵母菌共同培養提升酵母菌耐鹽能力的方法，簡單易行，可用于提高酵母菌在高鹽環境中的生長性能。

附圖說明

圖1為經培養后培養基中酵母菌數。