[發明專利]新城疫雞胚接種免疫液的制備方法

在審

• 申請號: 201811213618.0
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109432414A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 劉華棟;陸冰洋;李婷婷;丁樹榮;王彩先;李志春;唐娟;詹麗娥
• 申請（專利權）人: 山西省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/17
• 分類號: A61K39/17;A61P31/14;C12N7/00
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源;武建云

本發明公開了一種新城疫雞胚接種免疫液的制備方法，包括如下步驟：（1）、采集發病雞場病死雞的內臟器官，置于?20℃冰箱冷凍，凍硬后取出融化，待完全融化后再次冷凍，如此反復循環3次；（2）、取1g組織混合物置于無菌研缽中研磨，加入1000mL的生理鹽水，研磨至勻漿狀后8000rpm離心，取上清液；（3）、將上清液使用PCR方法鑒定，確定為新城疫病毒；（4）、將上清液使用0.22μm的濾膜過濾后，分別接種于營養瓊脂和鮮血瓊脂檢測其是否含有細菌。將免疫液接種于孵化至12日齡的受精蛋中，這樣孵化出的雞就具有更高的抗體水平，提升其對新城疫病毒的免疫力。

技術領域

本發明屬于禽類疫苗制備領域，具體為一種新城疫雞胚接種免疫液的制備方法。

背景技術

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病。發病雞和隱性感染雞是本病的主要傳染源，病雞可以通過口、鼻分泌物和糞便將病毒排出。病毒在病雞所有組織器官、體液、分泌物和排泄物中。病毒可經消化道、呼吸道，也可經眼結膜、受傷的皮膚和泄殖腔黏膜侵入機體。病毒能夠感染多種禽類，雞最易感。本病一年四季均可發生，但以冬春天氣寒冷季節發病較多。雞場的雞群一旦感染發病后，可于4～5d波及全群。具有較高的發病率和病死率，是當前危害養雞業的一種主要傳染病之一。世界動物衛生組織（OIE）將其列為A類疫病。我國列入重大傳染病，也是禽類重點防控的傳染病之一。新城疫主要是通過疫苗接種來防控，通常是雛雞在出殼后一周進行疫苗的接種，接種后再過20d后才能產生抗體，也就是在1月齡雛雞體內的免疫力主要依靠母源抗體。如果母源抗體水平較低，則雛雞就得不到有效的保護。隨著病原的變異，新城疫病毒的毒力在不斷的增強，這就要求雛雞能有足夠高的抗體水平來抵御強毒的感染。

基于上述情況，申請人研究出新城疫雞胚接種免疫液進行超前免疫，可以給雛雞提供足夠的免疫力。

發明內容

針對新城疫雞胚接種免疫液進行超前免疫，本發明目的是提供一種新城疫雞胚接種免疫液的制備方法。

本發明是采用如下技術方案實現的：

一種新城疫雞胚接種免疫液的制備方法，包括如下步驟：

（1）、采集發病雞場病死雞的內臟器官，置于-20℃冰箱冷凍，凍硬后取出融化，待完全融化后再次冷凍，如此反復循環3次；

（2）、 取1g組織混合物置于無菌研缽中研磨，加入1000mL的生理鹽水，研磨至勻漿狀后8000rpm離心，取上清液；

（3）、將上清液使用PCR方法鑒定，確定為新城疫病毒；

（4）、將上清液使用0.22μm的濾膜過濾后，分別接種于營養瓊脂和鮮血瓊脂檢測其是否含有細菌；

（5）、取無菌的上清液注射于10日齡的SPF雞胚尿囊腔中，于37℃孵化器內孵化；

（6）、將在孵化器中培養120h未死亡的雞胚取出，用滅菌注射器吸出尿囊液，通過血凝試驗檢測尿囊液中的含毒量；當病毒效價低于2⁴時，則需要使用透析袋對尿囊液進行濃縮；當病毒效價高于2⁴時，使用滅菌生理鹽水對其進行稀釋；將病毒效價為2⁴的病毒尿囊液吸入滅菌容器里，-20℃凍存備用；

（7）、將病毒效價調至為2⁴的尿囊液接種于1日齡SPF雞腦內，觀察8日內的發病和死亡情況，如沒有發病和死亡，或在最后一天內出現個別發病和死亡，則尿囊液符合要求，否則棄去；

（8）、將病毒效價為2⁴的尿囊液進行稀釋，將尿囊液病毒效價稀釋為2²時尿囊液即為免疫液，置于-20℃保存，備用。