[發明專利]新城疫雞胚接種免疫液的制備方法

在審

• 申請號: 201811213618.0
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109432414A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 劉華棟;陸冰洋;李婷婷;丁樹榮;王彩先;李志春;唐娟;詹麗娥
• 申請（專利權）人: 山西省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/17
• 分類號: A61K39/17;A61P31/14;C12N7/00
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源;武建云

1.一種新城疫雞胚接種免疫液的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）、采集發病雞場病死雞的內臟器官，置于-20℃冰箱冷凍，凍硬后取出融化，待完全融化后再次冷凍，如此反復循環3次；

（2）、 取1g組織混合物置于無菌研缽中研磨，加入1000mL的生理鹽水，研磨至勻漿狀后8000rpm離心，取上清液；

（3）、將上清液使用PCR方法鑒定，確定為新城疫病毒；

（4）、將上清液使用0.22μm的濾膜過濾后，分別接種于營養瓊脂和鮮血瓊脂檢測其是否含有細菌；

（5）、取無菌的上清液注射于10日齡的SPF雞胚尿囊腔中，于37℃孵化器內孵化；

（6）、將在孵化器中培養120h未死亡的雞胚取出，用滅菌注射器吸出尿囊液，通過血凝試驗檢測尿囊液中的含毒量；當病毒效價低于2⁴時，則需要使用透析袋對尿囊液進行濃縮；當病毒效價高于2⁴時，使用滅菌生理鹽水對其進行稀釋；將病毒效價為2⁴的病毒尿囊液吸入滅菌容器里，-20℃凍存備用；

（7）、將病毒效價調至為2⁴的尿囊液接種于1日齡SPF雞腦內，觀察8日內的發病和死亡情況，如沒有發病和死亡，或在最后一天內出現個別發病和死亡，則尿囊液符合要求，否則棄去；

（8）、將病毒效價為2⁴的尿囊液進行稀釋，將尿囊液病毒效價稀釋為2²時尿囊液即為免疫液，置于-20℃保存，備用。

2.根據權利要求1所述的新城疫雞胚接種免疫液的制備方法，其特征在于：步驟（5）的具體方法為：將孵化至10日齡的受精蛋取出，使用碘酊消毒，而后使用酒精脫碘處理，將蛋橫放在蛋托上，在氣室下方1mm的位置打孔，將打孔后的受精蛋平躺置于蛋托上，孔朝上，使用滅菌注射器抽取上清液0.2mL，豎直向下注入孔內，用融化的石蠟封口后置于37℃孵化器內繼續孵化。

3.根據權利要求1所述的新城疫雞胚接種免疫液的制備方法，其特征在于：步驟（6）中，濃縮方法為：先將透析袋置于開水中煮沸10min，取出后將一頭用專用夾子夾住，將50mL尿囊液注入透吸袋里，入口處也用專用夾子夾住；取500g蔗糖平鋪入手術盤里，將裝有50mL尿囊液的透析袋置于蔗糖上面，當透析袋里的尿囊液減少至10-15mL即可停止濃縮；用無菌吸頭將透析袋里的病毒尿囊液吸入滅菌容器里，-20℃凍存備用。

4.根據權利要求1所述的新城疫雞胚接種免疫液的制備方法，其特征在于：步驟（7）中，將病毒效價調至為2⁴的尿囊液接種于1日齡SPF雞腦內，方法是將孵出12~24h的雛雞頭頂正上方消毒，用滅菌注射器抽取0.1mL的尿囊液，在頭頂處45°角斜刺入雛雞腦內，將尿囊液注入腦內。