[發明專利]一種用于出土面食文物的鑒定方法

在審

• 申請號: 201811212168.3
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109521105A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 朱展云;劉柳;楊軍昌
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 貴州國防工業專利中心 52001
• 代理人: 符津銘

1.一種用于出土面食文物的鑒定方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一：樣品前處理，所述前處理方法為：提取并分離后的含古代面食標志物的凝膠樣品依次經過脫色-脫水-保溫-再脫水-酶解-干燥處理；

步驟二：將步驟一處理后的樣品用固相萃取柱脫鹽、真空干燥后，溶于緩沖液A；離心處理，收集上清液，進行高效液相色譜分析檢測，洗脫液為緩沖液B；所述緩沖液A為2％乙腈，0.1％甲酸；所述的緩沖液B為98％乙腈，0.1％甲酸；

步驟三：依次經過電噴霧和串聯質譜分析；

步驟四：采用MASCOT軟件在以種子植物和真菌為種類限制的Uniprot蛋白數據庫中進行檢索分析。

2.根據權利要求1所述的一種用于出土面食文物的鑒定方法，其特征在于：樣品脫色方法為：將含有出土面食文物樣品提取物的凝膠的著色區域切成多個約1mm²的小塊，分別用25mM的碳酸氫銨和50％的乙腈脫色2次，每次1h。

3.根據權利要求1所述的一種用于出土面食文物的鑒定方法，其特征在于：高效液相色譜的分析條件為：用自動進樣器加入高效液相色譜的自制2cm C18柱及10cm C18柱中；樣品加入的速率是15μL/min持續4min，洗脫速率為400nL/min持續91min，洗脫液濃度從2％線性增加到35％，然后在5min內線性增加到80％后持續8min，最終回到2％持續2min。

4.根據權利要求1所述的一種用于出土面食文物的鑒定方法，其特征在于：串聯質譜分析條件：質譜分辨率為60,000；串聯質譜分析采用碰撞誘導解離模式，標準碰撞能量為35％，離子碎片用線性離子阱檢測；10個豐度最高的離子計數在5000以上的母離子進入二級質譜分析；電噴霧電壓為1.5kV；采用自動增益控制來防止離子阱過滿，在離子阱中累積1×10⁴個離子來產生二級質譜；質荷比范圍是350-2,000Da。

5.根據權利要求1所述的一種用于出土面食文物的鑒定方法，其特征在于：檢索分析的檢索參數為：胰蛋白酶模式，允許誤切數2，脲甲基化是固定修飾，脫氨基化、氧化為可選修飾，母離子允許誤差20ppm，碎片離子允許誤差0.1Da；質量控制方法為MASCOT e-value小于0.05；至少鑒定出一條特異性肽段時可以實現蛋白鑒定；所有鑒定出的肽段都用BLAST在無冗余NCBI蛋白數據庫中重新搜索，以確定序列的特異性。