[發明專利]一種檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201811211654.3
• 申請日: 2018-10-18
• 公開（公告）號: CN109270272A
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 李奎;于林;李雙法;付清山;程云龍;渠海;劉功成;付光宇;吳學煒
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發明公開了一種檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，包括包被有抗突變型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）的硝酸纖維素膜，偶聯有鼠抗人IgG抗體的熒光微球結合物，抗突變型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）抗體系列校準品和樣本稀釋液。本發明采用免疫層析方法結合熒光微球偶聯技術，在免疫層析分析的基礎上結合熒光微球信號放大技術，利用熒光信號測量儀器即可測量出光量子產額，該光量子產額與樣品中的待測物質的量成比例關系，由此可建立校準曲線并計算出樣品中待測物質的含量。本發明試劑盒具有較高等靈敏度和特異性，反應時間僅需10?15min，方便快速，即適合大型醫院檢測，也適合基層醫療機構、社區醫療服務站、臨床科室、門診等即時檢測。

技術領域

本發明涉及臨床免疫檢測技術，尤其是涉及一種采用免疫熒光法檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，本發明還涉及該試劑盒的制備方法。

背景技術

類風濕性關節炎（RA）是一種慢性全身性炎性疾病，是最常見的自身免疫疾病之一，在世界范圍內發病率達 1%，在我國發病率約0.3%～0.6%。RA 的主要表現就是關節炎癥導致的關節損傷和功能喪失。對RA 進行早期的診斷并立即采取適宜的治療, 對于預防全部關節的損傷至關重要。而到目前為止，關節炎給機體帶來的物理損傷還不能修復，所以要盡可能提前對疾病進行干涉治療，以減少不可修復的損傷程度。這意味著RA的早期診斷和早期治療對患者的生活質量至關重要。這也就要求我們要盡早對RA進行診斷，而血清學標記物的可檢測階段明顯要早于臨床指標。

RA的診斷標記物很多，主要包括類風濕因子RF、抗核周因子(APF)、抗角蛋白(AKA)、抗CCP、RA33，抗Sa、6-磷酸葡萄糖異構酶等等。類風濕因子RF及ACR標準對早期RA診斷效果并不好，而大部分標記物在特異性和敏感性方面都存在一些不足。目前應用得最為廣泛的是抗CCP(環瓜氨酸肽)，這是一種人工合成的多肽，其最顯著的性能就是有很好的特異性，但其敏感性不夠高(不到70%)。

最近幾年，一種新的診斷標記物---抗突變型瓜氨酸化波形蛋白(抗MCV)的出現給RA，特別是早期RA診斷提供了一個全新的選擇。在獲得與抗CCP同樣高的特異性的同時，抗MCV抗體的檢測可以獲得極好的敏感性(80%左右)。此外，研究還發現，抗MCV的水平變化可以有效監控RA的治療過程。在一項對類克藥物治療的監控研究顯示，抗MCV的水平變化要比抗CCP水平變化提早6個月出現，也就是說可以提前半年對治療方案和藥物選擇提供有效建議。這也是自身抗體定量檢測相對于定性檢測的重要價值之一。抗MCV抗體在患者血清中出現的階段也比其他標記物要更早，這對于RA的盡早診斷是極具意義的。

目前，抗MCV抗體檢測有ELISA法、膠體金法等。ELISA法需要專用設備，反應時間比較長，檢測步驟繁雜；膠體金法靈敏度和特異性較低，應用受到限制。截至目前，利用熒光微球標記技術針對抗MCV抗體進行快速定量檢測的試劑盒在我國還是空白。

發明內容

本發明的目的在于提供一種采用熒光法快速、靈敏、準確定量檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，本發明還提供該試劑盒的制備方法。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：

本發明所述的檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，包括包被有抗突變型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）的硝酸纖維素膜，偶聯有鼠抗人IgG抗體的熒光微球結合物，抗突變型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）抗體系列校準品和樣本稀釋液。

所述熒光微球包括不同粒徑且能與活性物質結合的聚苯乙烯微球、Eu球或量子點微球。

所述抗突變型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）抗體系列校準品以突變型瓜氨酸化波形抗體陰性血清或分析緩沖液為校準品基質，加入抗MCV-IgG抗體陽性配制而成。

所述樣本稀釋液由0.1M磷酸緩沖液、1%吐溫-20和0.5%酪蛋白組成。

所述抗突變型瓜氨酸化波形蛋白為天然純化或基因重組等抗原。