[發明專利]一種檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒及其制備方法在審
| 申請號： | 201811211654.3 | 申請日： | 2018-10-18 |
| 公開（公告）號： | CN109270272A | 公開（公告）日： | 2019-01-25 |
| 發明（設計）人： | 李奎;于林;李雙法;付清山;程云龍;渠海;劉功成;付光宇;吳學煒 | 申請（專利權）人： | 鄭州安圖生物工程股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N21/64 |
| 代理公司： | 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 450016 河南省鄭州*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 波形蛋白 瓜氨酸 突變型 熒光微球 光量子 試劑盒 種檢測 抗體 偶聯 鼠抗人IgG抗體 免疫層析分析 硝酸纖維素膜 信號放大技術 成比例關系 測量儀器 大型醫院 發明試劑 即時檢測 抗體系列 臨床科室 免疫層析 社區醫療 校準曲線 樣本稀釋 熒光信號 靈敏度 結合物 校準品 包被 制備 服務站 測量 門診 檢測 | ||
1.一種檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，其特征在于：包括包被有抗突變型瓜氨酸化波形蛋白的硝酸纖維素膜，偶聯有鼠抗人IgG抗體的熒光微球結合物，抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體系列校準品和樣本稀釋液。
2.根據權利要求1所述的檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，其特征在于：所述熒光微球包括不同粒徑且能與活性物質結合的聚苯乙烯微球、Eu球或量子點微球。
3.根據權利要求1所述的檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，其特征在于：所述抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體系列校準品以突變型瓜氨酸化波形抗體陰性血清或分析緩沖液為校準品基質，加入抗MCV-IgG抗體陽性配制而成。
4.根據權利要求1所述的檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，其特征在于：所述樣本稀釋液由0.1M磷酸緩沖液、1%吐溫-20和0.5%酪蛋白組成。
5.根據權利要求1所述的檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒，其特征在于：所述抗突變型瓜氨酸化波形蛋白為天然純化或基因重組等抗原。
6.一種檢測抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體的試劑盒的制備方法，其特征在于：包括下述步驟：
第一步，制備包被有抗突變型瓜氨酸化波形蛋白的硝酸纖維素膜
取硝酸纖維素膜貼于不干膠襯板上，放置于劃膜儀上，按照劃膜儀操作規程，以1ul/cm的噴量進行膜的包被；其中檢測線包被有濃度為0.5-1mg/ml的MCV蛋白，質控線包被有濃度為1-2mg/ml的羊抗鼠IgG抗體，包被后置于37℃干燥5小時備用；
第二步，制備偶聯有鼠抗人IgG抗體的熒光微球結合物墊
用EDC溶液和NHS溶液活化熒光微球，將活化后的熒光微球進行超聲，然后加入一定量的鼠抗人IgG抗體，置于振蕩器上反應1～2h，用低溫高速離心機離心后，棄去上清，將沉淀用含有蛋白的熒光微球保存液稀釋混勻，超聲分散后，將偶聯結合物按照3ul/cm的量噴涂于聚酯玻纖上，置于37℃干燥5小時備用；
第三步，熒光層析試劑組裝
將第二步制得的熒光微球結合物墊與第一步制得的硝酸纖維素膜的不干膠襯板進行組貼，形成熒光層析卡；將熒光層析卡切割成4.0mm寬的紙條，裝配到塑料卡中并用鋁箔袋密封包裝；
第四步，制備抗突變型瓜氨酸化波形蛋白抗體系列校準品
用抗突變型瓜氨酸化波形抗體陰性血清或分析緩沖液為校準品基質稀釋抗MCV-IgG抗體高值陽性溶液，配置標定后的系列濃度為0U/ml、20U/ml、100U/ml、200U/ml、500U/ml、1000U/ml；
第五步：制備樣本稀釋液
采用0.1M磷酸緩沖液、1%吐溫-20和0.5%酪蛋白配置樣本稀釋液。
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