[發明專利]一種與肝細胞增殖相關circ_2072的篩選、檢測以及其應用

在審

• 申請號: 201811209052.4
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109371117A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 郭建林;閆培碩;王改平;郭學強;靳偉;白格;李莉菲;徐存拴
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/113;A61K31/7105;A61P1/16
• 代理公司: 北京易正達專利代理有限公司 11518
• 代理人: 陳桂蘭

本發明涉及一種與肝細胞增殖相關circ_2072的篩選、檢測以及其應用，所述circRNA為circ_2072，其序列如SEQ ID NO.1所示，該circRNA的篩選方法為：構建大鼠肝再生模型，從肝再生模型中提取總RNA，然后所提取的總RNA用Solexa RNA的paired?end測序法及find_circ分析法進行分析，最后篩選得到如SEQ ID NO.1所示的circRNA。circ_2072可在制備治療促進肝細胞增殖藥物中進行應用。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種與肝細胞增殖相關circ_2072的篩選、檢測以及其應用。

背景技術

肝臟是人體的最大內臟器官，參與蛋白質合成和許多生理活動，包括代謝、解毒和防御，并在體內穩態中起極其關鍵的作用。病毒、藥物和毒物等因素均可損害肝臟。然而，肝臟具有其他器官無法比擬的自我修復和再生能力。因此，解碼肝臟的自我修復和再生能力及機制有重要意義。

環狀RNA(circRNA)是一類廣泛存在于哺乳動物細胞中的內源性RNA分子，它們首尾相接形成閉合的環狀RNA分子，不易被RNA外切酶降解。

本申請人通過研究發現，circ_2072表達水平與肝細胞增殖密切相關，因此，其在與肝病治療中具有重要的應用，并為制備促肝細胞增殖藥物提供新靶點。

發明內容

有鑒于此，發明的目的是提供一種與肝細胞增殖相關circ_2072的篩選、檢測以及其應用，解決了現有技術中存在的不足。

發明的目的是通過以下技術方案來實現：

本發明的一個目的為提供一種與肝再生相關circRNA的篩選方法，該篩選方法即為本發明的一個發明點。所述circRNA為circ_2072，其序列如SEQ ID NO.1所示，該circRNA的篩選方法為：構建大鼠肝再生模型，從肝再生模型中提取總RNA，然后通過篩選得到如SEQID NO.1所示的circRNA。

進一步地，所述篩選為篩選出再生肝中與細胞增殖相關circRNA，篩選滿足以下4個條件的circRNA，(1)根據差異表達基因分析結果中的差異倍數(fold-change)值和p值，篩選出p<0.05和差異倍數在2倍以上的circRNA；(2)優先選擇發揮miRNA海綿作用的外顯子類circRNA；(3)circRNA表達的豐度，以可代表circRNA表達量的FPKM值為依據，篩選出FPKM值大于1的circRNA；(4)circRNA序列中的miRNA結合位點數目分布情況，結合位點數目為1-3個，優選2個。

本發明的另一個目的為提供一種所述circ_2072的檢測方法，該檢測方法尤其是引物序列的使用為本發明的另一個發明點。所述檢測方法為采用實時熒光定量PCR檢測，實時熒光定量PCR中的引物包括circ_2072上游引物和circ_2072下游引物，所述circ_2072上游引物和circ_2072下游引物分別為SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。

進一步地，所述實時熒光定量PCR中還包括內參上游引物和內參下游引物，所述內參上游引物和內參下游引物分別如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

本發明的又一個目的為提供一種能夠調節肝細胞增殖的作用靶點，該調節肝細胞增殖的作用靶點的確定為本發明的又一個發明點。所述靶點為所述的circ_2072，該circ_2072的堿基序列如SEQ ID NO.1所示，通過過表達或增加circ_2072能夠促進肝細胞的增殖。

本發明的再一個目的為提供一種促進肝細胞增殖的方法，該調節物的選擇為本發明的再一個發明點。所述方法為通過加入或過表達所述的circ_2072能夠促進肝細胞的增殖。