[發(fā)明專利]口含煙中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811208385.5
• 申請(qǐng)日: 2018-10-17
• 公開（公告）號(hào): CN111057740A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)大為;鄭賽晶;沈軼;高嶧涵;汪剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海新型煙草制品研究院有限公司;上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12Q1/14
• 分類號(hào): C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/445;C12R1/19
• 代理公司: 北京大成律師事務(wù)所 11352
• 代理人: 楊宇宙

本發(fā)明公開了口含煙中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法，稱取口含煙樣品，加人到D/E中和肉湯培養(yǎng)基中，混勻制得樣液；加入制備好的菌液1mL，均質(zhì)1min，獲得1：10樣品勻液；將上述樣品勻液稀釋成1：100的樣品勻液；按上述操作，依次制成十倍遞增系列的稀釋樣品勻液；選取2～3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液，每個(gè)平皿1mL，兩組平行，并做空白對(duì)照；將瓊脂傾注于每個(gè)平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻；待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)T₁時(shí)間；培養(yǎng)完成后記錄稀釋倍數(shù)和菌落數(shù)量。本發(fā)明通過(guò)稀釋作用使菌落總數(shù)的回收率有明顯提高，降低了口含煙對(duì)菌落總數(shù)生長(zhǎng)的抑制作用，較為真實(shí)的檢測(cè)出口含煙的菌落總數(shù)，為口含煙的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于口含煙技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種口含煙中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

口含煙是一種經(jīng)口腔黏膜的方式獲取尼古丁的無(wú)煙氣煙草制品。由于口含煙的消費(fèi)方式是口含，因此口含煙制品中的微生物數(shù)量需要進(jìn)行檢測(cè)并控制。微生物數(shù)量最常用的指標(biāo)之一為菌落總數(shù)，一般指樣品經(jīng)過(guò)處理后，在一定條件下培養(yǎng)后，所得每g(mL)檢樣中形成的大腸菌落的數(shù)。如果口含煙中菌落總數(shù)嚴(yán)重超標(biāo)，可能會(huì)引起腸道傳染病或食物中毒。

現(xiàn)有的技術(shù)方案主要集中在食品中菌落總數(shù)的檢測(cè)，而口含煙是一種新型煙草制品，其對(duì)菌落的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。由于抑制作用的存在，無(wú)法準(zhǔn)確檢測(cè)口含煙中菌落總數(shù)，因此，現(xiàn)有的方法是不適用于口含煙中菌落總數(shù)的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)或不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對(duì)口含煙的菌落總數(shù)的檢測(cè)方法缺失，以及口含煙對(duì)菌落總數(shù)的抑制作用，提出了口含煙中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明具有如下構(gòu)成：

口含煙中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1:準(zhǔn)確稱取口含煙樣品，加人到稀釋液中，均質(zhì)，制得質(zhì)量濃度為1：20-30的樣品勻液并靜置0.5-2小時(shí)；

S2:取出定量的樣品勻液，并加入定量的對(duì)應(yīng)濃度的預(yù)制的金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌等量混合的菌液，制得混合勻液，其中加入的菌液的體積與取出的定量的樣品勻液的體積比為1：100；

S3:將混合勻液進(jìn)行10倍遞增的逐級(jí)稀釋至預(yù)設(shè)的計(jì)劃濃度，得到混合勻液系列；

S4:選取樣品勻液系列中2個(gè)或者3個(gè)連續(xù)稀釋度的混合勻液接種至無(wú)菌平皿中；

S5:將接種至無(wú)菌平皿中的混合勻液進(jìn)行培養(yǎng)；

S6：培養(yǎng)完成后，記錄菌落數(shù)量并計(jì)算；

其中，S3步驟和S4步驟可以同時(shí)進(jìn)行，也可以分步進(jìn)行。

優(yōu)選的，所述S1步驟中的稀釋液為D/E中和肉湯培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，所述S1步驟中的質(zhì)量濃度為1：30。

優(yōu)選的，所述S1步驟中的靜置時(shí)間為1.5-2小時(shí)。

優(yōu)選的，所述S2步驟具體為：取出50mL的樣品勻液，并加入0.5mL的對(duì)應(yīng)濃度的預(yù)制的金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌等量混合的菌液，制得混合勻液。

優(yōu)選的，所述S3步驟和S4步驟完成的總時(shí)間控制在15分鐘內(nèi)。

優(yōu)選的，所述S4步驟做三組平行試驗(yàn)。

優(yōu)選的，所述S4步驟中將接種至無(wú)菌平皿中的混合勻液進(jìn)行培養(yǎng)，具體為：將15-20mL冷卻至46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂傾注于S3所述的無(wú)菌平皿中，混勻，待瓊脂凝固后，再加3mL～4mL結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂覆蓋平板表層，翻轉(zhuǎn)無(wú)菌平皿，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-48小時(shí)。

優(yōu)選的，所述S4步驟中的培養(yǎng)時(shí)間為24±2小時(shí)。