[發明專利]口含煙中菌落總數的檢測方法

在審

• 申請號: 201811208385.5
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN111057740A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 嚴大為;鄭賽晶;沈軼;高嶧涵;汪剛
• 申請（專利權）人: 上海新型煙草制品研究院有限公司;上海煙草集團有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/445;C12R1/19
• 代理公司: 北京大成律師事務所 11352
• 代理人: 楊宇宙

1.口含煙中菌落總數的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1:準確稱取口含煙樣品，加人到稀釋液中，均質，制得質量濃度為1：20-30的樣品勻液并靜置0.5-2小時；

S2:取出定量的樣品勻液，并加入定量的對應濃度的預制的金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌等量混合的菌液，制得混合勻液，其中加入的菌液的體積與取出的定量的樣品勻液的體積比為1：100；

S3:將混合勻液進行10倍遞增的逐級稀釋至預設的計劃濃度，得到混合勻液系列；

S4:選取樣品勻液系列中2個或者3個連續稀釋度的混合勻液接種至無菌平皿中；

S5:將接種至無菌平皿中的混合勻液進行培養；

S6：培養完成后，記錄菌落數量并計算；

其中，S3步驟和S4步驟可以同時進行，也可以分步進行。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S1步驟中的稀釋液為D/E中和肉湯培養基。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S1步驟中的質量濃度為1：30。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S1步驟中的靜置時間為1.5-2小時。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S2步驟具體為取出50mL的樣品勻液，并加入0.5mL的對應濃度的預制的金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌等量混合的菌液，制得混合勻液。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S3步驟和S4步驟完成的總時間控制在15分鐘內。

7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S4步驟做三組平行試驗。

8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述S4步驟中將接種至無菌平皿中的混合勻液進行培養，具體為將15-20mL冷卻至46℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂傾注于S3所述的無菌平皿中，混勻，待瓊脂凝固后，再加3mL～4mL結晶紫中性紅膽鹽瓊脂覆蓋平板表層，翻轉無菌平皿，置于培養箱中培養18-48小時。

9.根據權利要求1或8所述的檢測方法，其特征在于，所述S4步驟中的培養時間為24h±2小時。