[發明專利]用于PCR陣列的多基因絕對定量方法

在審

• 申請號: 201811207651.2
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109750090A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 李銘洲;鄭尤琇
• 申請（專利權）人: 奎克生技光電股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 吳志紅;臧建明

本發明提供一種用于PCR陣列的多基因絕對定量方法，待測核酸樣品含有至少一種核酸標靶。在測試載具的多個反應孔中分別配置用以擴增多個標準品DNA或欲測定的核酸標靶的引子。之后，將已知拷貝數目的多個標準品DNA及核酸樣品混合加入反應孔中，對標準品DNA及核酸樣品進行qPCR。分別針對每一標準品DNA設計具有序列特異性的正向引子及反向引子的組合，在正向引子及反向引子所對應的區域之間具有相同的DNA模版序列。用以擴增多個標準品DNA以及欲測定的核酸標靶的引子具有相似的擴增效率。

技術領域

本發明涉及一種絕對定量方法，尤其涉及一種用于PCR陣列的多基因絕對定量方法。

背景技術

隨著現代生醫技術的發展及臨床需求，許多診斷方法需要針對目標基因進行絕對定量。舉例而言，HIV或C型肝炎(HCV)等感染的病毒量(viral load)及療程監控，或是器官移植病人的病毒量監控。在現有技術中，若欲使用qPCR技術以96孔盤進行測定，則須將標準品與待測樣品放在不同的孔洞中，以避免彼此干擾，因此，須使用相當多的孔洞數，對實驗流程進行以及測試成本上造成不良影響。

基于上述，針對具有多個反應孔的測試載具，在運用qPCR技術對核酸樣品進行絕對定量時，如何改善實驗順暢度并降低測試成本，為目前所需研究的重要課題。

發明內容

本發明提供一種用于PCR陣列的多基因絕對定量方法，針對具有多個反應孔的測試載具，在運用qPCR技術對核酸樣品進行絕對定量時，能夠有效地改善實驗順暢度并降低測試成本。

本發明用于PCR陣列的多基因絕對定量方法，包括以下步驟，待測核酸樣品含有至少一種核酸標靶。在測試載具的多個反應孔中分別配置用以擴增多個標準品DNA或欲測定的核酸標靶的引子。之后，將多個已知拷貝數目但數目不同的標準品DNA及待測核酸樣品混合加入多個反應孔中，對多個標準品DNA及核酸樣品進行qPCR。各標準品DNA分別具有針對每一標準品DNA設計的具序列特異性的正向引子及反向引子的組合，以避免在多個標準品之間產生干擾以及標準品與待測樣品之間彼此干擾，因此，多個標準品DNA可在相同反應中混合且獨立擴增而不彼此影響。此外，用以擴增多個標準品DNA以及欲測定的核酸標靶的引子具有相似的擴增效率，多個標準品DNA在正向引子及反向引子所對應的區域之間具有相同的DNA模版序列，用以確保擴增多個標準品DNA以及欲測定的核酸標靶時不會有差異，以準確測出待測物的拷貝數目。

在本發明的一實施例中，以拷貝數目對數值[log(拷貝數目)]為橫軸，Cq值為縱軸，依據多個標準品DNA的拷貝數目對數值[log(拷貝數目)]以及Cq值制作標準曲線之后，將核酸標靶的Cq值代入標準曲線，以得到核酸標靶的拷貝數目。

在本發明的一實施例中，擴增效率包括Tm值。

在本發明的一實施例中，針對測試載具的多個反應孔分出多個群組(cluster)，每一群組由多個反應孔組成，在每一群組的多個反應孔中配置同一種用以擴增標準品DNA或核酸標靶的引子。

在本發明的一實施例中，每一群組的反應孔組成為3×3。

在本發明的一實施例中，每一群組用以針對多個標準品DNA中的其中一者或單一種類的核酸標靶進行qPCR。