[發(fā)明專利]用于敲除CXCL12基因的腺相關(guān)病毒重組載體及其構(gòu)建方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811204627.3
• 申請日: 2018-10-16
• 公開（公告）號: CN109234314B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳意雄;蔡曉龍;鄒杰;朱鵬飛;白易鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 漢恒生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N5/10;C12N15/66;A61K35/768;A61P35/00
• 代理公司: 常州市權(quán)航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 黃晶晶

1.一種用于敲除CXCL12基因的腺相關(guān)病毒重組載體，其特征在于，所述腺相關(guān)病毒載體至少包括：如下可操作性連接的序列元件：

5’末端反相重復(fù)序列，CMV啟動子，sacas9編碼序列，polyA信號序列，U6啟動子序列，gRNA序列，3’末端反相重復(fù)序列,所述gRNA序列如SEQ ID NO.1中第4600～4620位所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腺相關(guān)病毒重組載體，其特征在于：

所述重組載體序列如SEQ ID NO.1所示，

所述5’末端反相重復(fù)序列如SEQ ID NO.1中第1～141位所示；

所述CMV啟動子序列如SEQ ID NO.1中第154～737位所示；

所述sacas9編碼序列如SEQ ID NO.1中第762～3345位所示；

所述polyA信號序列如SEQ ID NO.1中第4137～4344位所示；

所述U6啟動子序列如SEQ ID NO.1中第4351～4591位所示；

所述3’末端反相重復(fù)序列如SEQ ID NO.1中第4710～4850位所示。

3.如權(quán)利要求1～2任一項所述腺相關(guān)病毒重組載體用于制備膠質(zhì)瘤治療藥物的用途。

4.一種細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞內(nèi)含有如權(quán)利要求1～2任一項所述腺相關(guān)病毒重組載體。

5.一種試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中包括如權(quán)利要求1～2任一項所述的腺相關(guān)病毒重組載體和藥學(xué)上可接受的載體，或者如權(quán)利要求4所述的細(xì)胞和藥學(xué)上可接受的載體。

6.如權(quán)利要求1～2任一項所述用于敲除CXCL12基因的腺相關(guān)病毒重組載體的構(gòu)建方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步驟：

(1)gRNA設(shè)計和雙鏈合成；

(2)AVV-sacas9重組載體構(gòu)建。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中g(shù)RNA擴(kuò)增時采用的正向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，反相引物的序列如SEQ ID NO.3所示。