[發明專利]用于敲除Egr3基因的腺相關病毒重組載體及其構建方法和用途在審
| 申請號： | 201811203666.1 | 申請日： | 2018-10-16 |
| 公開（公告）號： | CN109295098A | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 陳意雄;蔡曉龍;鄒杰;朱鵬飛;白易鑫 | 申請（專利權）人： | 漢恒生物科技（上海）有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/864 | 分類號： | C12N15/864;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 常州市權航專利代理有限公司 32280 | 代理人： | 黃晶晶 |
| 地址： | 201800 上海市嘉定*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 腺相關病毒 重組載體 敲除 重復序列 反相 構建 基因敲除載體 腫瘤血管生成 編碼序列 肝癌疾病 肝癌模型 序列元件 有效抑制 基因 移植瘤 生長 治療 發現 研究 | ||
1.一種用于敲除Egr3基因的腺相關病毒重組載體，其特征在于，所述腺相關病毒重組載體至少包括如下可操作性連接的序列元件：
5’末端反相重復序列，CMV啟動子，sacas9編碼序列，polyA信號序列，U6啟動子序列，gRNA序列，3’末端反相重復序列。
2.根據權利要求1所述的腺相關病毒重組載體，其特征在于：
所述腺相關病毒重組載體序列如SEQ ID NO.1：所示，
所述5’末端反相重復序列如SEQ ID NO.1：中第1～141位所示；
所述CMV啟動子序列如SEQ ID NO.1：中第154～737位所示；
所述sacas9編碼序列如SEQ ID NO.1：中第762～3345位所示；
所述polyA信號序列如SEQ ID NO.1：中第4137～4344位所示；
所述U6啟動子序列如SEQ ID NO.1：中第4351～4591位所示；
所述gRNA序列如SEQ ID NO.1：中第4600～4620位所示；
所述3’末端反相重復序列如SEQ ID NO.1：中第4710～4850位所示。
3.如權利要求1或2所述腺相關病毒重組載體用于制備肝癌治療藥物的用途。
4.一種細胞，其特征在于，所述細胞內含有如權利要求1或2所述腺相關病毒重組載體。
5.一種試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中包括如權利要求1或2所述的腺相關病毒重組載體和藥學上可接受的載體，或者如權利要求4所述的細胞和藥學上可接受的鹽。
6.如權利要求1或2所述的腺相關病毒重組載體的構建方法，所述方法至少包括以下步驟：
(1)gRNA設計和雙鏈合成；
(2)AVV-sacas9重組載體構建。
7.如權利要求2或3所述的EGR3基因敲除載體的構建方法，其特征在于，所述步驟(1)中gRNA擴增時采用的正向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，反相引物的序列如SEQ ID NO.3所示。
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