[發明專利]一種非動物源性樹鼩精子體外獲能液及其應用

在審

• 申請號: 201811200096.0
• 申請日: 2018-10-16
• 公開（公告）號: CN109182255A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 李亞輝;楊明華;李雪;宋文菲;解道豪;吳文靜
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076
• 代理公司: 北京名華博信知識產權代理有限公司 11453
• 代理人: 李中強

1.一種非動物源性樹鼩精子體外獲能液，其特征在于：所述的獲能液配方為NaCl0.6662g/100ml、KCl 0.0236g/100ml、MgSO₄ 0.0143g/100ml、KH₂PO₄ 0.0161g/100ml、Glucose 0.0901g/100ml、pyruvic acid 0.0011g/100ml、lactic acid 185μl、CaCl₂·2H₂O0.00441g/100ml～0.0441 g/100ml、NaHCO₃ 0.084g/100ml～0.252 g/100ml、環糊精0.0655g/100ml～3.0831 g/100ml。

2.根據權利要求1所述的一種非動物源性樹鼩精子體外獲能液的應用，其特征在于：采用所述獲能液進行樹鼩精子體外獲能的方法的具體步驟為：

1）洗精液及獲能液的配制

分別配制樹鼩洗精液和獲能液，調節pH至7.3-7.4；

2）精子采集及計數

分離并取出樹鼩附睪尾，用精細手術剪在附睪尾上剪幾個開口, 隨后將附睪尾置于含1 mL 37 ℃洗精液的小離心管中，繼續于37 ℃孵育10min 讓精子游出；

3）精子洗滌

用精細鑷子夾出附睪組織，將精子懸液轉移至滅菌后的15ml離心管中，加入10ml37℃預熱的洗精液，輕輕混勻，800g離心5min；棄上清，再加入10mL的洗精液，800g離心5min；棄上清，加入獲能液重懸精子，使精子的濃度為10×10⁶個/mL；

4）體外獲能

將上述精液分到5ml孵育管中，每管800μl，放入CO₂培養箱中培養。

3.根據權利要求2所述的一種非動物源性樹鼩精子體外獲能液的應用，其特征在于：步驟1）中，所述的洗精液配方為NaCl 0.6975g/100ml、KCl 0.0356g/100ml、MgSO₄ 0.0143g/100ml、KH₂PO₄ 0.0161g/100ml、Glucose 0.0901g/100ml、pyruvic acid 0.0011g/100ml、lactic acid 185μl、CaCl₂·2H₂O 0.0294g/100ml、NaHCO₃ 0.0168g/100ml、環糊精0.1000g/100ml、Hepes(Na salt) 0.1302g/100ml、HepesAcid form 0.1192g/100ml。

4.根據權利要求3所述的一種非動物源性樹鼩精子體外獲能液的應用，其特征在于：步驟4）中，CO₂培養箱中溫度控制為37℃，CO₂含量為5%，培養時間為4～10h。