[發明專利]一種鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子標記引物及方法

有效

• 申請號: 201811194935.2
• 申請日: 2018-10-15
• 公開（公告）號: CN108998567B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 包文泉;敖敦
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京冠榆知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦;趙慧

一種鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子標記引物及方法，所述分子標記引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物tKF的序列：ACTCGAACCCGGAACTAG，所述反向引物tKR的序列：CGACCGATTTCTGCGTAT。鑒別方法包括如下步驟：(1)葉片樣本的采集；(2)葉片樣本總基因組DNA的提??；(3)利用鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子標記引物，對步驟(2)中的葉片樣本總基因組DNA中的目標基因進行擴增，得到擴增產物；(4)對步驟(3)中的擴增產物進行純化和測序；(5)對步驟(4)中測序結果進行比對分析。基于trnK?UUU基因間隔區的堿基差異可以作為鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的種質區分的分子標記引物，且鑒別方法簡單，易操作。

技術領域

本發明涉及生物技術領域。具體地說是一種鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子標記引物及方法。

背景技術

長柄扁桃(Prunus pedunculata Pall)、蒙古扁桃(Prunus mongolica Maxim)和榆葉梅(Prunus triloba Lindl)是我國特有的經濟林樹種，自然分布于內蒙古、遼寧、河北、山西、陜西、甘肅等地區，具有極強的抗寒、抗旱特性，是我國半干旱荒漠化區生態建設的優選樹種。經研究發現，長柄扁桃種子含油率約56％，含油率高于蒙古扁桃和榆葉梅，其油中富含不飽和脂肪酸(96％～98％)，居所有植物油榜首，其中油酸含量高于70％，屬于高油酸植物油，與素有“食用植物油皇后”美稱的橄欖油相當，是可直接食用的功能保健油。2013年國家衛生計生委將長柄扁桃納入我國木本糧油樹種，可見，長柄扁桃在保障我國糧油安全和生態安全中的重要地位。扁桃屬植物中，長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅同為多年生灌木，分布廣泛，種質資源極為豐富，由于蒙古扁桃、榆葉梅與長柄扁桃生長環境相似，且三者全具有相似的形態特征等原因，生產及市場上常有以蒙古扁桃、榆葉梅冒充長柄扁桃的現象。偽品蒙古扁桃、榆葉梅與長柄扁桃的含油率及脂肪酸組分不一樣，不能代替長柄扁桃的經濟效益，因此，在市場流通時需要準確相互辨別。

目前，對長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的鑒定主要通過形態性狀和顯微鑒別等傳統鑒定方法，而傳統鑒定方法需要3-5年的生長周期且依賴的熟練的專業知識，不利于推廣。

近年來，隨著分子生物學及生物信息學的飛速發展，DNA條形碼鑒別技術因不受環境及形態特征的影響，操作簡單易行，且重復性和穩定性高等優點，已成為動植物鑒定的有效工具。植物DNA條形碼中，可用的基因組DNA有核基因組DNA(nrDNA)、葉綠體基因組DNA(cpDNA)和線粒體基因組DNA(mtDNA)，其中，nrDNA的進化速率最快，是細胞核內全自主的遺傳系統，其結構與組成極為復雜，各基因家族形成功能調控網絡，并且很多基因出現多拷貝現象，存在直系同源和旁系同源等問題。而mtDNA易發生基因重排、重復和丟失，并且植物mtDNA拷貝數較低，提取和純化較難，因此，在植物鑒定中nrDNA和mtDNA的應用范圍有限。相比于nrDNA和mtDNA，cpDNA既不存在較多的重復序列，也不出現頻繁的重排事件，它不受遺傳重組的影響，對鑒別復雜的物種具有特殊意義。同時，葉綠體基因組絕大數屬于母系遺傳，具有相對獨立的演化路線，其進化速率適中，較適用于屬及種等低分類階元的鑒定分析。植物葉綠體基因trnK-UUU在光合作用中具有重要作用，由于其功能的限制，trnK-UUU基因進化速度較慢，在屬及種的水平上遺傳變異較小，具有通用性強、易擴增等特點，在植物鑒別研究中常選取作為分子鑒定的DNA條形碼?？梢越Y合DNA快速提取檢測技術，尋找和建立3種扁桃屬植物便捷的鑒定方法。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子鑒別引物及方法。

為解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：

一種鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子標記引物，分子標記引物為葉綠體基因組。

上述的鑒別長柄扁桃、蒙古扁桃和榆葉梅的分子標記引物，所述分子標記引物包括正向引物和反向引物；