[發明專利]一種包含E4BP4基因的慢病毒重組載體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811188982.6
• 申請日: 2018-10-12
• 公開（公告）號: CN109266683B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 陸前進;王子君;趙明
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/66;C12N7/01;A61K48/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理事務所(普通合伙) 11756
• 代理人: 祝妍

1.包含E4BP4基因的慢病毒重組載體在制備抑制濾泡輔助性T淋巴細胞活化和/或分化藥物中的應用，其特征在于，所述包含E4BP4基因的慢病毒重組載體包括E4BP4基因和GV358慢病毒載體；所述E4BP4基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述抑制濾泡輔助性T淋巴細胞活化和/或分化的藥物還包括藥學上可接受的輔料。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述GV358慢病毒載體的元件順序如下：Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述E4BP4基因插入至GV358慢病毒載體多克隆位點的Agel和BamHI酶切位點之間；所述包含E4BP4基因的慢病毒重組載體的元件順序如下：Ubi-E4BP4--3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin。

5.權利要求1所述的應用，所述包含E4BP4基因的慢病毒重組載體的制備方法包括以下步驟：1)PCR擴增獲得所述E4BP4基因片段；2)將所述E4BP4基因片段與GV358慢病毒載體分別進行雙酶切獲得酶切后的E4BP4基因片段和酶切后的GV358慢病毒載體；3)將步驟2)中所述酶切后的E4BP4基因片段和酶切后的GV358慢病毒載體連接獲得包含E4BP4基因的慢病毒重組載體。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟2)中所述雙酶切使用的酶為AgeI酶和BamH I酶。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟1)中擴增所述E4BP4基因片段的引物對包括E4BP4-F和E4BP4-R；所述E4BP4-F的序列如SEQID No.2所示；所述E4BP4-R的序列如SEQID No.3所示。