[發明專利]一種軟骨細胞引物層的制備方法及軟骨組織

在審

• 申請號: 201811188565.1
• 申請日: 2018-10-12
• 公開（公告）號: CN109251887A
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 張輝;李濤;張玉光;王旭;左巖霞;張兆蕾
• 申請（專利權）人: 山東麥德克斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李青

本發明涉及軟骨組織工程領域，具體而言，涉及一種軟骨細胞引物層的制備方法及軟骨組織。一種軟骨細胞引物層的制備方法，將載體和自體軟骨細胞進行三維動態共培養，即得；所述三維動態共培養的培養條件包括：36.5～37.5℃，4.5～5.5％CO₂，9～11％O₂；所述三維動態共培養的培養體系中包括9～12ng/mL堿性成纖維細胞生長因子；在所述三維動態共培養前，所述初代自體軟骨細胞在所述載體中的密度為1.6～2.0×10⁵/cm²；所述載體包括骨水泥；所述三維動態共培養的培養體系的組成包括：DMEM培養基、4～5mM L?谷氨酰、體積分數為9～11％的血清和雙抗生素。制得的軟骨細胞引物層利于與自體軟骨細胞融合，具有較好的生物相容性。

技術領域

本發明涉及軟骨組織工程領域，具體而言，涉及一種軟骨細胞引物層的制備方法及軟骨組織。

背景技術

人體軟骨在運動型損傷和各種關節炎發生后不能自身自然修復，因此，人工培育軟骨組織對于改善老年人生活質量，延長運動員職業生涯有著不可替代的作用。人工軟骨其實分為兩種：一種不含軟骨細胞，這是目前研究較多的；另一種則不僅含軟骨細胞，且包含軟骨細胞培養支架體系，可稱為組織工程化人工軟骨。組織化工程人工軟骨至今沒有商業化產品。

目前研究較多的人工軟骨類型，這類人工軟骨植入材料主要分為兩類，即人工合成的材料和天然生物材料，具體而言，天然生物材料生物相容性好，但缺乏一定的機械強度，難于塑形。人工材料的軟骨假體雖然在一定程度上能起到替代軟骨的作用，但還存在易磨損松動、界面潤滑性差、缺乏生物活性等等不足，其性能有待進一步提高。而組織工程軟骨相容性高，具有更明顯的優勢，也更適合患者。但價格昂貴是患者無法接受的，在國外，拇指蓋大小的軟骨球，售價在650美元，限制了組織工程軟骨在國內的開展與應用。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種軟骨細胞引物層的制備方法，其將載體和自體軟骨細胞進行三維動態共培養，即得。制得的軟骨細胞引物層利于與自體軟骨細胞融合，具有較好的生物相容性。

本發明的第二目的在于提供一種基于人自體細胞的軟骨組織，可以在同樣費用的條件下培養成本更低的軟骨組織，同時具有較好的生物相容性，滿足患者的需求。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種軟骨細胞引物層的制備方法，將載體和自體軟骨細胞進行三維動態共培養，即得；

所述三維動態共培養的培養條件包括：36.5～37.5℃，4.5～5.5％CO₂，9～11％O₂；

所述三維動態共培養的培養體系中包括10ng/mL堿性成纖維細胞生長因子；

在所述三維動態共培養前，所述自體軟骨細胞在所述載體中的密度為1.6～2.0×10⁵/cm²；

所述載體包括骨水泥；

所述三維動態共培養的培養體系的組成包括：DMEM培養基、4～5mML-谷氨酰、體積分數為9～11％的血清和雙抗生素。

一種基于人自體細胞的軟骨組織，由上述的方法制備得到的軟骨細胞引物層和連接于其上的自體軟骨組織組成；

所述軟骨細胞引物層用于連接骨和所述自體軟骨組織。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

(1)本發明是基于人自體細胞培育的可移植用人組織工程軟骨，不是人工軟骨，與人體有更好的適應性。

(2)技術操作上來說，本發明是自體細胞培育，非干細胞培育，不存在患者出現排斥反應等情況。