[發明專利]用于DNA編碼化合物庫合成中酶鏈反應的T4 DNA連接酶緩沖液及其應用

有效

• 申請號: 201811187566.4
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109439710B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 吳阿亮;舒啟勝;安玉龍;楊琪;袁堂蜜;龔平秀;袁友浪;張在紅;李科;裴增飛;陳雯婷;蒯樂天;楊洪芳;彭宣嘉
• 申請（專利權）人: 上海藥明康德新藥開發有限公司;無錫生基醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 鄭權

1.一種用于DNA編碼化合物庫構建中雙鏈DNA片段之間的鏈接的T4 DNA連接酶緩沖液，其特征在于，所述T4 DNA連接酶緩沖液為無DTT的10X T4 DNA連接酶緩沖液，其配方是500mM Tris-HCl，100mM MgCl₂，5～20mM ATP，pH 8.0。

2.如權利要求1所述的T4 DNA連接酶緩沖液，其特征在于，ATP的終濃度是5mM，6mM，7mM，8mM，9mM，10mM，11mM，12mM，13mM，14mM，15mM，16mM，17mM，18mM，19mM，或20mM。

3.一種用于DNA編碼化合物庫構建中雙鏈DNA片段之間的鏈接的T4 DNA連接酶緩沖液，其特征在于，所述T4 DNA連接酶緩沖液為無Tris的2X T4 DNA連接酶緩沖液，其配方是40mM磺酸類試劑，20mM MgCl₂，1～5.0mM ATP，8％的1,3-丙二醇，2.0mM DTT，pH8.0。

4.一種用于DNA編碼化合物庫構建中雙鏈DNA片段之間的鏈接的T4 DNA連接酶緩沖液，其特征在于，所述T4 DNA連接酶緩沖液為無Tris，無DTT的2X T4 DNA連接酶緩沖液，其配方是40mM磺酸類試劑，20mM MgCl₂，1～5.0mM ATP，8％的1,3-丙二醇，pH 8.0。

5.如權利要求3或4所述的T4 DNA連接酶緩沖液，其特征在于，磺酸類試劑是4-羥乙基哌嗪乙磺酸，N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸，2-(N-嗎啉)乙磺酸，3-(N-瑪琳代)丙磺酸，N-2-羥乙基哌嗪-N'-3-丙磺酸，或2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸鈉。

6.如權利要求3或4所述的T4 DNA連接酶緩沖液，其特征在于，ATP終濃度是1.0mM，1.5mM，2.0mM，2.5mM，3.0mM，3.5mM，4.0mM，4.5mM，或5.0mM。

7.如權利要求1所述的T4 DNA連接酶緩沖液在DNA編碼化合物庫構建中用于雙鏈DNA片段之間的鏈接后下一步有Pd參與的反應的應用。

8.如權利要求3所述的T4 DNA連接酶緩沖液在DNA編碼化合物庫構建中用于雙鏈DNA片段之間的鏈接后下一步有小分子胺或可以與小分子胺反應的有機小分子試劑參與的有機反應的應用。

9.如權利要求4所述的T4 DNA連接酶緩沖液在DNA編碼化合物庫構建中用于雙鏈DNA片段之間的鏈接后下一步有小分子胺或可以與小分子胺反應的有機小分子參與的，且有Pd參與的金屬反應的應用。

10.如權利要求7-9任一項所述的應用，其特征在于，酶鏈反應的最終反應液中T4 DNA連接酶緩沖液是0.1X～2.0X。

11.如權利要求7-9任一項所述的應用，其特征在于，該T4 DNA連接酶緩沖液參與的酶鏈反應是應用于單個離心管反應或應用于96孔板反應。