[發明專利]一種PD1人源化BALB/c小鼠模型的構建方法及其應用有效
| 申請號： | 201811179743.4 | 申請日： | 2018-10-10 |
| 公開（公告）號： | CN109266656B | 公開（公告）日： | 2021-02-19 |
| 發明（設計）人： | 琚存祥;趙靜;李松;楊笑柳;張明坤;侯歡歡;高翔 | 申請（專利權）人： | 江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12;C12N15/85;C12N15/113;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京天盾知識產權代理有限公司 11421 | 代理人： | 孫倩倩 |
| 地址： | 210032 江蘇省南京*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 pd1 人源化 balb 小鼠 模型 構建 方法 及其 應用 | ||
1.一種制備PD1人源化BALB/c小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)構建表達針對BALB/c小鼠PD1基因的sgRNA的質粒；
(2)構建人源化PD1基因的載體；
(3)將步驟(1)所述質粒體外轉錄獲得的sgRNA與步驟(2)的載體以及Cas9 mRNA或Cas9蛋白注射至鼠受精卵細胞質或細胞核中，移植入受體母鼠生產PD1基因修飾人源化鼠模型；
步驟(2)中所述載體為包含人源化PD1基因的核酸序列的載體，所述核酸序列編碼的蛋白含有人PD1蛋白的功能域，所述載體包含如下序列：TGGCAGCCCAGACAGAGTTGAGGCCAGAGCAGCTTCAAAGATGTCTTGGTGCCTGTTTCCTGTGTGCATGTCAGTCTCCTCTGGGTAAGGCCCACATGTGTGTGCTCAGCAAGTCTGTATTTCCTTGACCCTGAGCCTTCTGACCGTACCTACATACCCAACCGCACCTATATACCCGACCGCAGGTTCAACTGCTGACATCATATGGGTCCCAGTAGTGGGTACTTTTGAGTGCTGGTGGAATGTTATGTGTTATGTGTCAGTGTGCATTTATGTGGCAAGAAGCTTGCCAGTGCGGCAGGCATTTCCTGAGAAGAGCCATGAGACCCTGCATGCTGCCTGACCCTGGCAGTACCACCCAGAACACTTTATTTGGGTGAGCCTAGACCTTCTGTCCACTTGAGAGACAATGACACAGCTGATCTTTGGAGGCTTCTTGCTGTGACCTCTGATCTGGCTGGAAGACATGACTGCTACCCTATGCCTTCTGCTACTCAGGGTAGCTCTGACATGCTTGGTGGGCTCCCTGGGACAAAATACTGCCTGGACCCCAAGCTTACTAAAGAATCCACCCTCTCCAAGTCTGAGGTTTCCATGGAAACCCTACACTCCCACCTCACTATCCCACTGACCCTTCAGACAGAACTAGGCTAGCCAACCAGAAGTCTAAGACTGGAACATTCAGGTCAGGCCTGGAACATCTTGAACAGGAGTGGGAAGGTAGAGACATCTTCGGGGAAAATATCCCAAAGTCTCAAAGGACAGAATAGTAGCCTCCAGACCCTAGGTTCAGTTATGCTGAAGGAAGAGCCCTGCTTGTTGGAGGTTACTTATTCACAACCTACAAGAAGCTACAAGCTCCTAGGTAGGGGGAACTGCTTACGATATTCTGCCCTGGAATGGGTCTGAGAGCACATTCCTCTCCAGGGGGTTCAGAAAAGATGTCAGAAAGGGTGTACAGGCTCCTTCCTCACAGCTCTTTGTTCTTCTGCATTTCAGAGTCCCCAGACAGGCCCTGGAACCCCCCCACCTTCTCCCCAGCCCTGCTCGTGGTGACCGAAGGGGACAACGCCACCTTCACCTGCAGCTTCTCCAACACATCGGAGAGCTTCGTGCTAAACTGGTACCGCATGAGCCCCAGCAACCAGACGGACAAGCTGGCCGCCTTCCCCGAGGACCGCAGCCAGCCCGGCCAGGACTGCCGCTTCCGTGTCACACAACTGCCCAACGGGCGTGACTTCCACATGAGCGTGGTCAGGGCCCGGCGCAATGACAGCGGCACCTACCTCTGTGGGGCCATCTCCCTGGCCCCCAAGGCGCAGATCAAAGAGAGCCTGCGGGCAGAGCTCAGGGTGACAGGTGCGGCCTCGGAGGCCCCGGGGCAGGGGTGAGCTGAGCCGGTCCTGGGGTGGGTGTCCCCTCCTGCACAGGATCAGGAGCTCCAGGGTCGTAGGGCAGGGACCCCCCAGCTCCAGTCCAGGGCTCTGTCCTGCACCTGGGGAATGGTGACCGGCATCTCTGTCCTCTAGCTCTGGAAGCACCCCAGCCCCTCTAGTCTGCCCTCACCCCTGACCCTGACCCTCCACCCTGACCCCGTCCTAACCCCTGACCTTTGTGCCCTTCCAGAGAGAAGGGCAGAAGTGCCCACAGCCCACCCCAGCCCCTCACCCAGGCCAGCCGGCCAGTTTCAAGGCATGGTCATTGGTATCATGAGTGCCCTAGTGGGTATCCCTGTATTGCTGCTGCTGGCCTGGGCCCTAGCTGTCTTCTGCTCAACAAGTATGTCAGGTAAGGCTCATCATACCCTGCTTCTGTCCTGCCAAACCTTGTAGTCACTGTACTTCACACATACGTAGATCACCAGAAGGGTGGTCATGCACCACACACACTCTGACCACTACAAAAGCCTGTGGCCGCCCCACCCACACCTAGCCTCAGGCTGCTGGCTTTCCTAAACAACTAGTGAGAGCTGCCACCTCCAGGAGGTCTGGTCATCAGCCAGCTAAGAGGCCACAGCTAATATCTGCTACATGCCTACCCTGTGTTGTGGTACACCAGGAAAGGGGACACTGATGCACCTGTGCCTGTGGCAGGCCCTACTCCTCAATTCATTGTCCTACCAGGAACTCCCCGTTAGTAAATGGGAAGGGTGCCCGTGGGGATGGAAAGGCTGGTGCTTGCCCATGGTGTAGATCTCTTCAGTGCCTGACACGCCCCTCCTGAGCACACAAAACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACGAGAGAGAAAGATGGAGAGACAGAGGGAGGACATTCCTCCACTAGGGAAGATGGCTCTGTAGCTGCCCTCTAACCCAAACTGTGTGTCTCAACAGAGGCCAGAGGAGCTGGAAGCAAGGACGACACTCTGGTGAGTATGAGTTTTCTTTCTTGAGTGATCTATCCCAGGCCACCCCCAGGTCTTGGTACAGGTAGAGAGACCATGGGGCCTACAGGGCTAGAGCCTGGAGAGCCCAGCTCCCATTTTCTACCAGGCCCCCAGAGCCATATCCTGTTGTTCCTCCCAGCAGCTGACCCCACTGTGTGTACCCCTGTCGTGTCCAACGTGGTCACGACTTGTTTTCTTCTGTGCAGAGACAAGGGGCAAAAGTCAAATTTTGGAATCCTAAACCCGCCAGGAAACATTTAACGATAGAAACTGGGCCAGAAACACGAGGCTGCACCCTAAATATCAAGAAGTCAATGGGGAGCCTATGGCCTCTGTGGGTTCTGTGCCTGGGCAGCTGTTAGGTCAGGTCCCAGCTTCCATGACTGAGG，該載體能夠將鼠源PD1基因的外顯子2-3的編碼區替換為人源PD1基因的外顯子2-3，保留了小鼠PD1跨膜區及胞內區，
步驟(3)中針對鼠源PD1基因的sgRNA的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO:2所示。
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