[發明專利]長鏈非編碼RNA-HOXA-AS2在骨組織損傷修復中的應用

有效

• 申請號: 201811177581.0
• 申請日: 2018-10-10
• 公開（公告）號: CN109136227B
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 朱鑫星;林俊堂;于金金;鐘根深;郭睿;杜江;楊芬
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/6883
• 代理公司: 廣州駿思知識產權代理有限公司 44425
• 代理人: 潘雯瑛

1.一種過表達載體pLV-HOXA-AS2在用于制備骨組織損傷修復的試劑中的用途，其特征在于：由HOXA-AS2基因片段與慢病毒空載體pLV構建而成；所述HOXA-AS2基因片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述慢病毒空載體pLV的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO:3所示。

2.權利要求1所述的用途，其中所述過表達載體pLV-HOXA-AS2的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：采用限制性內切酶BamH I和Xba I分別對慢病毒載體pLV以及HOXA-AS2基因片段進行雙酶切，并采用T4 DNA連接酶體系對酶切后的HOXA-AS2基因片段以及線性慢病毒載體pLV進行連接反應，然后轉化感受態細胞，篩選陽性菌落，提取陽性菌落的質粒，得到所述的過表達載體pLV-HOXA-AS2。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：所述HOXA-AS2基因片段的制備方法，包括以下步驟：依據所述長鏈非編碼RNA-HOXA-AS2的核苷酸序列，采用DNA合成儀，根據固相亞磷酰胺三酯法原理對HOXA-AS2基因片段進行雙鏈合成，同時在其5’末端和3’末端上分別添加BamH I和Xba I酶切位點，得到含有特異性酶切位點的HOXA-AS2基因片段。

4.一種誘導型細胞在用于骨組織損傷修復的試劑中的用途，其特征在于：由權利要求1所述的過表達載體pLV-HOXA-AS2轉染HEK293T細胞構建而成。

5.權利要求4所述的用途，其中所述誘導型細胞的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：采用脂質體轉染試劑，將過表達載體pLV-HOXA-AS2以及慢病毒包裝質粒pSPAX2、pMD2G共同轉染到包裝細胞中，經培養后收集慢病毒上清液；然后，將慢病毒上清液加入到細胞載體中，經培養后得到穩定表達長鏈非編碼RNA-HOXA-AS2的誘導型細胞。

6.一種試劑盒在用于骨組織損傷修復檢測的試劑中的用途，其特征在于，含有用于檢測HOXA-AS2基因表達量的特異性引物；所述特異性引物包括：

上游引物：5’-GTTCAGCTCAAGTTGAACATA-3’，

下游引物：5’-AAACCTTGTAGATAGCTTGAG-3’。