[發(fā)明專利]一種黏菌素膠體金檢測試劑盒及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2018-10-10
• 公開（公告）號: CN109374907B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊春江;于在江;趙榮茂;袁志波;白民俊;吳迪;李月;孫奇武;秦麗麗;李慧俐
• 申請（專利權(quán)）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/531;G01N33/543
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本發(fā)明公開了一種黏菌素膠體金檢測試劑盒，其主要由黏菌素膠體金檢測試紙條、凍干的膠體金標(biāo)記黏菌素特異性單克隆抗體微孔試劑、微孔板架、定量移液管、樣本稀釋液組成。其中檢測試紙條由PVC背板、吸水墊、樣品墊、噴涂有包被有檢測抗原的檢測線（T線）和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線（C線）的硝酸纖維素膜（NC膜）構(gòu)成。試劑盒用于檢測雞蛋或牛奶中黏菌素殘留，無需昂貴設(shè)備，操作簡便，無需特殊培訓(xùn)，檢測靈敏度高，非常適合基層實驗室、現(xiàn)場檢測等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸藥殘留快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種黏菌素膠體金檢測試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

硫酸黏菌素是堿性多肽類抗生素，主要用于防治敏感菌的感染和促進(jìn)畜禽生長。硫酸黏菌素可以與細(xì)胞膜脂蛋白游離磷酸鹽結(jié)合，使得細(xì)胞膜表面張力減小、通透性增加，導(dǎo)致胞漿外流，細(xì)胞死亡。硫酸黏菌素對革蘭氏陰性菌(尤其大腸桿菌、沙門氏菌、綠膿桿菌、變形桿菌和嗜血桿菌等)有強(qiáng)抑制作用，對革蘭氏陽性菌(除金黃葡萄球菌和溶血性鏈球菌外)和真菌無作用。硫酸黏菌素口服難以吸收，毒性較低，不易造成藥物殘留，不易產(chǎn)生耐藥性。

2016年7月26日，我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布第2428號公告：為保障動物產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全，根據(jù)《獸藥管理條例》規(guī)定，農(nóng)業(yè)部組織開展了硫酸黏菌素安全性評價工作。根據(jù)評價結(jié)果，農(nóng)業(yè)部決定自2017年4月30日起，硫酸黏菌素將不再允許作為促生長劑添加到飼料中使用。自此硫酸黏菌素的應(yīng)用被嚴(yán)格限制。

2017年11月，農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于征求動物性食品中獸藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)意見的函中明確對黏菌素的殘留量做出嚴(yán)格規(guī)定，其殘留以黏菌素A和黏菌素B合計，牛奶殘留限量為50μg/kg，雞蛋為300μg/kg，畜禽組織為150~200μg/kg不等。大型養(yǎng)殖企業(yè)如中糧、伊利集團(tuán)等對黏菌素的內(nèi)部限量更為嚴(yán)格。

傳統(tǒng)的檢測黏菌素殘留的方法有液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫法（ELISA）等，其中前兩種方法為儀器方法，利用色譜技術(shù)對檢測樣本中的藥物殘留分離后以紫外分光法或質(zhì)譜定量檢測，其操作繁瑣、樣本制備要求高、檢測成本高、儀器設(shè)備價格更是昂貴，基層企業(yè)難以承受；酶聯(lián)免疫法作為基于抗原抗體免疫反應(yīng)的快速檢測方法，具有成本低廉、檢測快速等特點(diǎn)，在企業(yè)和基層實驗室中也有應(yīng)用，但其本身也有一定缺點(diǎn)，如操作過程需要穩(wěn)定的溫度環(huán)境、孵育時間過長、操作精密度要求高等，一般人員不經(jīng)過訓(xùn)練較難掌握，特別是針對像奶站、奶罐車、雞蛋收購等場合，較難以勝任。基于以上現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷，有必要開發(fā)新的檢測方法，滿足基層檢測實際需求。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，解決基層單位現(xiàn)場檢測黏菌素殘留的棘手難題和迫切需求，本發(fā)明提供了一種具有高靈敏度和特異性的黏菌素膠體金檢測試劑盒，其主要由P黏菌素膠體金檢測試紙條、凍干的膠體金標(biāo)記黏菌素特異性單克隆抗體微孔試劑、微孔板架、定量移液管、樣本稀釋液組成。本發(fā)明提供的檢測試劑盒無需昂貴設(shè)備，操作簡便，無需特殊培訓(xùn)，檢測靈敏度高，非常適合基層實驗室、現(xiàn)場檢測等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

本發(fā)明的另外一個目的是提供上述黏菌素膠體金檢測試劑盒的制備方法。該制備方法簡便、所需原料簡單，易于制備、可以在較短時間內(nèi)制備成功，產(chǎn)生較大經(jīng)濟(jì)效益。

本發(fā)明還提供了一種上述黏菌素膠體金檢測試劑盒在檢測牛奶、奶粉和雞蛋中黏菌素殘留的應(yīng)用。利用該方法檢測時，基層單位如乳品廠、奶站、養(yǎng)殖場等無需恒溫箱和酶標(biāo)儀，無需專門的場地，只要有采集好的樣本即可完成檢測。整體耗時僅為10min，省時省力。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種具有高靈敏度和特異性的黏菌素膠體金檢測試劑盒，其主要由黏菌素膠體金檢測試紙條、凍干的膠體金標(biāo)記黏菌素特異性單克隆抗體微孔試劑、微孔板架、定量移液管、樣本稀釋液組成。