[發明專利]一種黏菌素膠體金檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201811177138.3
• 申請日: 2018-10-10
• 公開（公告）號: CN109374907B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 楊春江;于在江;趙榮茂;袁志波;白民俊;吳迪;李月;孫奇武;秦麗麗;李慧俐
• 申請（專利權）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種黏菌素膠體金檢測試劑盒，其特征在于，由黏菌素膠體金檢測試紙條、包被有凍干的膠體金標記黏菌素特異性單克隆抗體微孔試劑、微孔板架、定量移液管、樣本稀釋液組成，其中：

所述的黏菌素膠體金檢測試紙條由PVC背板(1)、硝酸纖維素膜(2)、樣品墊(5)、吸水墊(6)構成，其中硝酸纖維素膜(2)為整個檢測反應的載體，粘貼在PVC背板(1)上，其上噴涂有包被有檢測抗原的檢測線(3)和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線(4)的，其檢測線端粘貼有樣品墊(5)，樣品墊的上端與檢測線的距離為4～10mm，并與硝酸纖維素膜重合1～3mm；其質控線端粘貼有吸水墊(6)，吸水墊與質控線的距離為4～10mm，并與硝酸纖維素膜重合1～3mm，檢測樣本時，樣品墊部分浸入檢測樣本，確保樣本能在虹吸作用下沿膠體金試紙條由樣品墊向吸水墊方向爬行；

所述的包被有檢測抗原的檢測線(3)，其檢測抗原是將黏菌素B與卵清蛋白的偶聯物CL-OVA；

所述的包被有羊抗鼠抗抗體的質控線(4)，在包被時加入染料，標記出質控線位置，以方便客戶檢測時識別試紙條的方向；

所述的樣品墊(5)為玻璃纖維或纖維素或者紡織聚合物，其經過緩沖液浸泡后晾干，所述緩沖液為含有5％蔗糖、3％甲醇、0.5％吐溫-20的0.01M pH為7.2的磷酸鹽緩沖液；

所述的吸水墊(6)為玻璃纖維；

所述包被有凍干的膠體金標記黏菌素特異性單克隆抗體(7)微孔試劑是將膠體金顆粒標記的黏菌素單克隆抗體稀釋至一定濃度，冷凍干燥在酶標微孔(8)中，然后用酶標板孔蓋(9)密封，其中制備黏菌素單克隆抗體的半抗原為利用丁二酸酐法合成的黏菌素B半抗原CL-HS，其結構式為：

其制備方法為：用分析天平準確稱量140mg硫酸黏菌素B和20mg丁二酸酐，裝入帶有磁力攪拌子的10ml棕色瓶中，加入3ml吡啶溶解，80℃恒溫油浴6h；吹干溶劑，用甲醇將殘留物充分洗滌3次，靜置后有大量沉淀；棄掉甲醇，將沉淀用凍干機冷凍干燥，即為黏菌素B半抗原CL-HS；

所述微孔板架為普通96孔酶標板板架；

所述定量移液管為普通的0.2ml塑料吸管，實際使用時也可以用微量移液器取代；

所述樣本稀釋液是25mM HEPES緩沖液，其中含有1％BSA，3％甘露醇，0.5％trixton-100，2％蔗糖。

2.根據權利要求1所述的一種黏菌素膠體金檢測試劑盒的檢測方法：

(1)采集樣本，采集好之后保存在2～8℃不超過6小時或者凍存于-20℃或者當場檢測；

(2)將采集的牛奶樣本可以直接檢測，奶粉樣本用水按照1:8的比例溶解混勻后檢測，雞蛋樣本需要將雞蛋打開后取蛋清、蛋黃混勻后，取1g蛋液加入10ml樣本稀釋液混勻后檢測；

(3)用塑料吸管或微量移液器吸取200μl準備好的樣本，溶解在微孔試劑中，上下吸打若干次，確保充分溶解，然后室溫計時5min；

(4)將試紙條的樣品墊段插入有樣本的微孔中，計時5min；

(5)判定結果：當試紙條的質控線顯色，檢測線顏色深于質控線時，樣本檢測結果為陰性；當試紙條的質控線顯色，檢測線顏色等于或淺于質控線時，樣本檢測結果為陽性，檢測線顏色越淺，陽性越強；當試紙條的質控線不顯色，樣本檢測結果為無效，應更換試紙條重新檢測。