[發明專利]一種花生突變體的快速篩選方法及應用

在審

• 申請號: 201811173302.3
• 申請日: 2018-10-09
• 公開（公告）號: CN109156352A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 王晶珊;禹山林;喬利仙;隋炯明;楊慶利;李冠;趙明霞;姜德鋒;郭寶太;朱虹
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/04
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 賈文健

本發明公開了一種花生突變體的快速篩選方法及應用，屬于花生育種領域。本發明花生突變體的快速篩選方法，是對花生離體誘變獲得的再生苗，采用SSR方法進行基因型上的突變性鑒定，淘汰基因型未突變的再生苗，鑒定的基因型突變的再生苗即為花生突變體。本發明對組培苗的突變性進行鑒定方法簡單，能夠有效淘汰未突變的再生苗，節省未突變再生苗嫁接移栽及后續突變性鑒定的無效勞動，從而節省人力物力財力。通過SSR方法篩選花生基因型突變體結合子代性狀篩選方法，能夠縮短育種時間2?3年。對于一些表型無明顯變異，但品質性狀發生變異的突變體，能通過SSR方法也能鑒定出。

技術領域

本發明屬于花生育種領域，具體涉及一種花生突變體的快速篩選方法及應用。

背景技術

花生是我國重要的油料作物和經濟作物之一，培育高產優質專用多抗性新品種是目前花生重要的育種目標。然而，花生栽培種遺傳多樣性較低，缺乏高抗、高油、耐鹽、高產性的優良品種資源，因此依靠雜交育種難以獲得突破性進展。誘變技術的應用可促進花生種質資源創新和加速品種改良進程，因為誘變育種可以誘導產生自然界不存在的或極為罕見的新性狀、新類型。但常規誘變育種技術，往往突變體嵌合性嚴重，因為突變是單細胞行為，因此造成很多性狀不能穩定遺傳，尤其是一些隱性突變往往被掩蓋。并且花生種子較大，在物理輻照時往往處理的種子較少，并且常以半致死量為適宜的誘變劑量，也即輻照處理的種子約一半不能正常發芽生長，因此達不到育種的選擇群體，因為誘變育種往往需要足夠大的群體才能獲得有益突變體。誘變與組織培養相結合，可以得到豐富的變異體，提高變異頻率，增加選擇幾率；克服突變體的嵌合性，提高變異性狀的穩定性，隱性突變可充分表現。但在誘變結合組織培養的離體誘變中，可獲得大量再生苗，包括突變的及未突變的再生苗。再生苗需經過嫁接、馴化煉苗才能移栽田間，程序復雜，需花費大量人力物力財力。并且移栽田間后獲得的種子，第二年播種田間(M₂代)，生育期間及收獲后才能觀察到表型明顯變異的材料，而品質性狀的變異需要各種測試，如含油率、蛋白含量、脂肪酸含量、各種糖分含量等。因此，離體誘變中突變體的常規鑒定，從誘變開始到可進行變異鑒定需要2～3年時間，不但時間長，并且各個階段工作量大，需耗費大量人力物力財力。

目前，SSR方法在花生農藝性狀標記上(周金超、楊鑫雷、崔順立等，花生SSR標記與農藝性狀的相關性，作物學報，2014，40(7)：1197-1204)，花生SSR指紋圖譜構建及遺傳多樣性分析(胡曉輝、毛瑞喜、苗華榮等，山東省46個花生品種SSR指紋圖譜構建及遺傳多樣性分析，核農學報，2016，30(10)：1925—1933)等方面有利用。苗華榮等(苗華榮、胡曉輝、崔鳳高等，花生輻照后M₂代突變材料的SSR分析，核農學報，2012,24(4)：680-683)對花生種子輻照后，表型明顯變異的M₂代突變材料進行SSR分析，結果表明突變體的DNA分子有重復或缺失等結構性變異。但利用SSR方法進行突變體篩選(鑒定)，尚未見報道。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明針對離體誘變獲得的再生苗，即試管苗，采用SSR方法進行突變性鑒定，淘汰基因型未突變的再生苗，突變的再生苗經嫁接煉苗移栽田間，采用如此方法，花生育種可節省大量人力物力財力。

為了達到上述目的，本發明的技術方案為：

一種花生突變體的快速篩選方法，步驟為：

(1)提取誘變親本花生品種和誘變后再生苗葉片的全基因組DNA，進行SSR的PCR擴增；

(2)對比誘變親本花生和誘變后再生苗的SSR擴增結果，選擇擴增結果呈現多態性的再生苗即為花生突變體，淘汰基因型未突變的再生苗。

在上述方案的基礎上，所述擴增結果呈現多態性是指擴增片段減少、擴增片段增加或擴增片段長度差異。

在上述方案的基礎上，所述SSR的PCR擴增結果的檢測方法為：