[發明專利]一種提取水培植物基因組DNA的試劑盒及提取方法在審
| 申請號： | 201811172858.0 | 申請日： | 2018-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN109136219A | 公開（公告）日： | 2019-01-04 |
| 發明（設計）人： | 王學敏;張錦錦;崔苗苗;溫紅雨 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 試劑盒 樣品緩沖液 基因組DNA 水培植物 液氮 材料預處理 葡萄糖溶液 體積分數 纖維素酶 乙醇溶液 除蛋白 混合液 體積比 異丙醇 異戊醇 凍傷 氯仿 手部 沉淀 耗時 清洗 溶解 | ||
1.一種提取水培植物基因組DNA的試劑盒，其特征在于，包括樣品緩沖液、DNA提取液、體積比24:1的氯仿：異戊醇混合液、異丙醇、體積分數70％～75％的乙醇溶液、ddH2O、纖維素酶；
所述樣品緩沖液為100～150g/L的葡萄糖溶液；
所述DNA提取液的配方如下：CTAB 2g、NaCl 1.4mol、0.5mol/L pH8.0的EDTA溶液4mL、1mol/L pH8.0的Tris-HCl溶液10mL、β-巰基乙醇2.5mL，雙蒸水定容至100mL。
2.根據權利要求1所述的提取水培植物基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述樣品緩沖液為100g/L的葡萄糖溶液或者150g/L的葡萄糖溶液。
3.一種利用權利要求1所述的試劑盒提取水培植物基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1，樣品預處理：將采集的水培植物組織與樣品緩沖液混合，研磨5～10min，加入樣品75mg/mL的纖維素酶溶液，置于37℃15min，得到破壁溶液；
S2，提取：向破壁溶液中加入1～2倍體積的DNA提取液，混勻，65℃水浴加熱20～40min，離心，收集上清液；
S3，除蛋白：向上清液中加入等體積的體積比24:1的氯仿：異戊醇混合液，上下顛倒混勻3min，靜置幾秒，吸取上層溶液；
S4，沉淀：向上層溶液中加入0.6倍體積的經4℃預冷的異丙醇，混勻，-20℃放置30～60min，離心，棄上清，收集DNA沉淀；
S5，清洗：在DNA沉淀中加入體積分數70％～75％的乙醇溶液，混合，離心，棄上清，最后置于通風處風干；
S6，溶解：風干的DNA沉淀用ddH2O溶解，-20℃保存備用。
4.根據權利要求3所述的提取水培植物基因組DNA的方法，其特征在于，S1中，水培植物組織與樣品緩沖液的比例為1g:1mL。
5.根據權利要求3所述的提取水培植物基因組DNA的方法，其特征在于，S2中，離心的條件為4℃、6000r/min離心5min。
6.根據權利要求3所述的提取水培植物基因組DNA的方法，其特征在于，S2、S4中離心的條件均為4℃、10000rpm離心10min。
7.根據權利要求3所述的提取水培植物基因組DNA的方法，其特征在于，S3中，靜置時間為3～10秒。
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