[發明專利]一種用于敲除CCR5基因的gRNA、gRNA組合物和CRISPR-Cas9系統及其用途

在審

• 申請號: 201811165368.8
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109402116A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 祝海寶;羅思施;陶米林;黃雨亭;阮錦輝
• 申請（專利權）人: 廣東赤萌醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N15/866;C12N15/12;A61K48/00;A61P31/18
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明提供了一種用于敲除CCR5基因的gRNA、表達載體和CRISPR?Cas9系統及其用途，本發明使用CRISPR?Cas9技術，對HIV病毒進入人體細胞的輔助受體CCR5基因進行切割，設計和操作簡便、突變效率高，成本低，而且有效實現CCR5基因的突變，可用于艾滋病基因治療技術的開發。

技術領域

本發明涉及一種用于敲除CCR5基因的gRNA、gRNA組合物和CRISPR-Cas9系統及其用途。

背景技術

獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)感染所引起的免疫系統疾病，是一種危害性極大的全球化傳染病。HIV以人體免疫系統中最重要的T淋巴細胞作為主要攻擊對象，造成免疫功能喪失，從而易患各種疾病，死亡率高達99％-100％。HIV在人體內的潛伏期能長達8-10年，很多HIV感染者在發展成艾滋病患者之前可以無病癥的生活，但病毒在人體內始終存在并不可治愈。雖然全世界眾多醫學研究人員專注于艾滋病的預防和治療，但至今尚未研制出特效藥物，由于HIV的變異極其迅速，因此也還沒有可用于預防的有效疫苗。

對于HIV感染的治療，目前的主要策略是最大限度和持久的降低病毒載量、獲得免疫功能重建和維持免疫功能、提高生活質量，以及降低HIV相關的發病率和死亡率。抗逆轉錄病毒治療(anti-retroviral therapy，ART)是近年來廣泛使用的治療手段，它有效抑制HIV在體內的復制，減少體內病毒載量，從而延長感染者的壽命。但藥物副作用、病毒的耐藥性突變、終身服藥的依從性等都是抗逆轉錄病毒治療在臨床使用上不可避免的問題。而以基因為基礎的治療方法可以持續的抑制病毒從而減少治療干預措施，是一種非常有前景的治療方式。

隨著基因編輯技術的興起，多國科學家都嘗試通過ZFN、TALENT、CRISPR-Cas9等基因編輯技術，敲除HIV入侵和整合過程中的關鍵基因，從而干預病毒的轉錄、復制和擴散。全球首例HIV感染的治愈發生在“柏林病人”身上，他接受了一名CCR5-Δ32基因突變純合體捐獻者的骨髓移植，此后的五年都沒有在其身上檢測到HIV病毒的蹤跡。HIV-1主要有R5-嗜性和X4-嗜性兩種，對應的輔助受體分別為CCR5和CXCR4，R5-嗜性病毒是目前最普遍感染且在感染的前期起主導作用的病毒類型。通過基因編輯的方式敲除或抑制細胞(如CD4+T細胞、淋巴細胞、骨髓干細胞等)表面的HIV病毒輔助受體CCR5的表達，抑制病毒擴散從而延緩和治療艾滋病，已經成為HIV基因治療研究的常見思路。