[發明專利]一種用于敲除CCR5基因的gRNA、gRNA組合物和CRISPR-Cas9系統及其用途在審
| 申請號： | 201811165368.8 | 申請日： | 2018-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN109402116A | 公開（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發明（設計）人： | 祝海寶;羅思施;陶米林;黃雨亭;阮錦輝 | 申請（專利權）人： | 廣東赤萌醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N15/866;C12N15/12;A61K48/00;A61P31/18 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 宋靜娜;郝傳鑫 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市高新*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 敲除 突變 基因治療技術 設計和操作 表達載體 輔助受體 人體細胞 有效實現 可用 切割 艾滋病 開發 | ||
1.一種用于敲除CCR5基因的gRNA，其特征在于，所述gRNA的靶序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:25中的一種所示。
2.根據權利要求1所述的gRNA，其特征在于，所述gRNA的靶序列如SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:21中的一種所示。
3.一種用于敲除CCR5基因的gRNA組合物，其特征在于，所述gRNA組合物由靶序列如SEQID NO:11所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA組成，或由靶序列如SEQ ID NO:11所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:18所示的gRNA組成，或由靶序列如SEQ ID NO:12所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA組成，或由靶序列如SEQ ID NO:17所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA組成，或由靶序列如SEQ ID NO:17所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:21所示的gRNA組成，或由靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:21所示的gRNA組成。
4.一種用于敲除CCR5基因的表達載體，其特征在于，所述表達載體是將如權利要求1或2所述的gRNA的DNA序列、或者如權利要求3所述的gRNA組合物的DNA序列連接到基礎載體上而得的，所述表達載體表達如權利要求1或2所述的gRNA、或者表達如權利要求3所述的gRNA組合物。
5.一種用于敲除CCR5基因的CRISPR-Cas9系統，其特征在于，包括如權利要求1或2所述的gRNA、或者如權利要求3所述的gRNA組合物，以及Cas9蛋白。
6.根據權利要求5所述的CRISPR-Cas9系統，其特征在于，所述Cas9蛋白為來源于金黃色釀膿葡萄球菌Staphylococcus aureus的Cas9蛋白。
7.一種用于敲除CCR5基因的試劑盒，其特征在于，包括：
(1)表達Cas9蛋白的載體、Cas9蛋白和Cas9蛋白對應的mRNA中的至少一種；以及
(2)如權利要求1或2所述的gRNA和表達如權利要求1或2所述的gRNA的載體中的至少一種，或者如權利要求3所述的gRNA組合物和表達如權利要求3所述的gRNA組合物的載體中的至少一種。
8.一種重組桿狀病毒，其特征在于，所述重組桿狀病毒是將如權利要求3所述的gRNA組合物的DNA序列和Staphylococcus aureus來源的Cas9蛋白的DNA序列連接到pFast-Bac表達載體上后包裝到桿狀病毒而得的，所述重組桿狀病毒表達所述gRNA組合物和所述Cas9蛋白。
9.如權利要求1或2所述的gRNA、如權利要求3所述的gRNA組合物、如權利要求4所述的表達載體或者如權利要求5或6所述的CRISPR-Cas9系統在制備預防或治療HIV感染的藥物中的用途。
10.如權利要求8所述的重組桿狀病毒在制備用于編輯哺乳動物細胞中CCR5基因的試劑中的用途。
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