[發(fā)明專利]能夠鑒定柱花草花粉不育基因的ISSR-SCAR標記及其鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811163171.0
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109112230B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃春瓊;劉國道;白昌軍;郇恒福;唐軍;劉一明;王文強;丁西朋;劉攀道;陳志堅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 趙蕊紅

本發(fā)明公開了一種能夠鑒定柱花草花粉不育基因的ISSR?SCAR標記及其鑒定方法，本發(fā)明提供了一段704bp能夠在不育柱花草中擴增得到的特異性DNA片段和該序列的一對引物，所述片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示，可用于鑒別不育柱花草，本發(fā)明提供的鑒定不育柱花草的方法具有操作簡單、重復(fù)性好、穩(wěn)定性強，為建立柱花草穩(wěn)定的雄性不育系提供新的理論基礎(chǔ)，為柱花草雜交育種奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子標記鑒定領(lǐng)域，具體涉及一種能夠鑒定柱花草花粉不育基因的ISSR-SCAR標記及其鑒定方法。

背景技術(shù)

柱花草(Stylosanthes)，巴西苜蓿，熱帶苜蓿等。描述夏季生長最旺的多年生直立的草本植物。高達1米。莖上多毛，葉羽狀三出。穗狀花序聚集成頂生頭狀花序，花黃色，莢果具一個結(jié)實的節(jié)和很小的喙，種子黃棕色。柱花草屬植物原產(chǎn)南美洲、中美洲及加勒比海地區(qū)。1962年華南熱帶作物研究院從中美洲引入海南試種，主要作為橡膠園覆蓋作物。1980年后，廣東、廣西、海南等地先后從澳大利亞、國際熱帶農(nóng)業(yè)中心引種，并應(yīng)用于生產(chǎn)。中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所從20世紀60年代起從哥倫比亞、澳大利亞等地引進柱花草種植，先后培養(yǎng)了熱研2號(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.2)、熱研5號(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.5)、西卡(Stylosanthes scabraVog.cv.Seca)、熱研7號(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.7)、熱研10號(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.10)、熱研13 號(Stylosanthes guianenisiscv.Reyan No.13)、熱研18號(Stylosanthes guianenisis cv.Reyin No.18)、熱研20號(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.20)及熱研21號(Stylosanthes guianenisiscv.Reyan No.21)等9個優(yōu)良柱花草品種。目前，熱研2號、熱研5號等優(yōu)良柱花草品種已在廣東、廣西、福建、海南、云南、貴州、四川等地區(qū)廣泛種植。這些品種均是通過常規(guī)選育或輻射育成的品種，還沒有雜交品種，因此，開展柱花草雜交育種顯得尤為重要。柱花草屬于十字授粉植物，因其花小、去雄困難，阻礙了開展雜交育種的進程，因此獲得穩(wěn)定的雄性不育系是開展雜交育種的前提。利用分子標記技術(shù)，篩選與柱花草花粉不育基因相關(guān)的分子標記，從而可以篩選出穩(wěn)定的柱花草雄性不育系，為柱花草雜交育種奠定基礎(chǔ)。

近年來，DNA分子標記技術(shù)逐步成熟和完善，在遺傳圖譜構(gòu)建、品種鑒定、親緣關(guān)系分析和基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用。目前常用的DNA分子標記主要有基于DNA分子雜交的RFLP、小衛(wèi)星DNA等和基于PCR反應(yīng)的RAPD、SCAR、SSR、SRAP等。序列特異性擴增區(qū)域(Sequence characterized amplified regions，SCARs)標記通常是由RAPD、 SRAP、ISSR標記轉(zhuǎn)化而來，是將上述分子標記篩選出的特異標記片段進行克隆和測序，根據(jù)其堿基序列設(shè)計一對特異引物，用于對特征擴增區(qū)域的特異性擴增。SCAR標記一般表現(xiàn)為擴增片段的有無，是一種顯性標記，具有穩(wěn)定性好、可重復(fù)性強等優(yōu)點，已成為育種實踐中能直接應(yīng)用的首選標記。經(jīng)查閱資料，發(fā)現(xiàn)目前尚未有關(guān)于能夠鑒定柱花草花粉不育基因的ISSR-SCAR標記的報道，本發(fā)明填補了該領(lǐng)域的空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點，提供一種能夠鑒定柱花草花粉不育基因的 ISSR-SCAR標記及其鑒定方法，該方法操作簡單、重復(fù)性好、穩(wěn)定性強，為建立柱花草穩(wěn)定的雄性不育系提供新的理論基礎(chǔ)，為柱花草雜交育種奠定基礎(chǔ)。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：能夠在不育柱花草中擴增得到的特異性DNA片段，所述片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。