[發明專利]一種納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法

在審

• 申請號: 201811157687.4
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109374605A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 于殿宇;鄒德智;于長華;王立琦;江連洲
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法。其利用了吐溫60修飾納米金，在米糠中的脂肪酶存在時，水解吐溫60的羧酸酯鍵，從而削弱了吐溫60的空間靜電排斥力，從而拉近了納米金之間的距離，使其聚集變藍。它解決了目前傳統的米糠中的脂肪酶活檢測方法過程復雜、成本昂貴、檢測速度慢、靈敏度低等問題。其發明步驟如下：使用吐溫60修飾納米金，構建了納米金比色傳感器，與不同活性的脂肪酶建立標準曲線，并應用于檢測米糠中的脂肪酶活性。在650和520nm處的吸光度比值與米糠中的脂肪酶活性在0.02～1.8mg/mL范圍內呈現良好的線性關系，檢出限為2.56×10^?4mg/mL(S/N＝3)。此過程無需樣品預處理、特異性強、靈敏度高，可實時檢測米糠生產過程中脂肪酶活性。

技術領域

本發明涉及一種納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法。

背景技術

我國米糠資源十分豐富，年產量約1000多萬噸，是一種量大面廣的可再生資源，是潛在的大宗油源和新型植物蛋白源，如何合理開發和利用米糠資源，變資源優勢為經濟優勢，是我們亟待解決的課題。米糠富含多種內源酶，其中與米糠酸敗變質有關的酶包括脂肪酶、脂肪氧化酶和過氧化物酶等，尤其脂肪酶對米糠貨架期及品質的影響最為顯著，在我國，雖然米糠已經受到一定的重視，但是由于其是副產物，加上其易酸敗，穩定性差且難以收集，深度開發利用仍然處于理論階段或者初級水平，大部分還被用作飼料，只有10％的米糠被用作制油或進一步提取植酸鈣、肌醇、谷維素等價值較高的產品。米糠要進行深加工增值，首先要防止酸敗的發生，而米糠穩定化是解決米糠酸敗變質的關鍵。米糠的變質主要是米糠中含有在常溫下易使米糠中脂肪水解為游離脂肪酸的脂肪酶。

目前，米糠中的脂肪酶活性檢測普遍采用酸堿滴定法、濁度法及光度法，但這些方法多存在靈敏度不高、誤差大、且費時費力、不適用于高通量檢測等不足。熒光法雖然靈敏度較高，但大部分可被脂肪酶水解的熒光底物均受限于反應介質的酸度，另外熒光猝滅等因素還可能影響實驗結果的精確性。對于動輒數以千計的定向進化庫而言，要進行高通量酶檢測，這些方法存在較大局限性。因此迫切需要建立高靈敏度、高選擇性，更加簡單、快速、準確的米糠中的脂肪酶檢測方法。

鑒于上述原因，進一步研究開發靈敏度高、特異性強、穩定性好、操作簡單、成本低的檢測方法具有重要的理論意義和實際應用價值，納米金因其獨特的表面等離子體共振(SPR)效應成為構建生物傳感器的優良材料，已被用于多種酶分析研究中，尤其是基于納米金的比色檢測方法由于其樣品無需預處理、簡單快速、靈敏度高、操作簡便等優點而倍受關注，并在食品檢測中廣泛應用。將制備的納米金比色傳感器用于實時檢測米糠中的脂肪酶活性的大小，對米糠生產具有重要的理論意義和實際應用價值。

發明內容

本發明是針對實際生產中，傳統檢測米糠中的脂肪酶活性的方法過程復雜，樣品檢測前需要預處理、耗時長且價格昂貴等問題，而提出的一種納米金比色法檢測米糠中的脂肪酶活性大小的方法，此方法用吐溫60修飾納米金，當米糠中的脂肪酶存在時，水解吐溫60的羧酸酯鍵，削弱了吐溫60的空間靜電排斥力，從而拉近了納米金之間的距離，使其聚集變藍。通過以下步驟實現：步驟一：納米金溶液的制備；步驟二：吐溫60-納米金比色傳感器的合成；步驟三：納米金比色傳感器測定條件的優化；步驟四：建立不同活性米糠中的脂肪酶的標準曲線；步驟五:米糠中的脂肪酶活性的實時檢測。

本發明的有益點是：本發明利用納米金比色法檢測米糠中的脂肪酶活性，解決了目前傳統的檢測方法檢測費用高、速度慢等不足，同時可以有效地改善我國目前米糠中的脂肪酶活性檢測速度慢、靈敏度不高、費用昂貴等問題。此過程使用方便、加工簡易、成本低廉、響應速度快、自動化操作、靈敏度高、特異性強，可以為生產過程中米糠中的脂肪酶活性的實時監測提供技術支持。

具體實施方式

具體實施方式一：一種納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，通過以下步驟實現：