[發(fā)明專利]一種納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811157687.4
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109374605A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于殿宇;鄒德智;于長華;王立琦;江連洲
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于用吐溫60-納米金比色傳感器檢測米糠中脂肪酶活性的方法通過以下步驟實現(xiàn)：

步驟一：納米金溶液的制備：將300μL HAuCl₄(0.1mol/L)溶液加入含有100mL超純水的三口燒瓶中，劇烈攪拌且加熱至沸騰，2min后加入4mL一定濃度現(xiàn)配的檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)反應一定時間后停止加熱，溶液顏色由黃色逐漸變?yōu)橥该骶萍t色自然冷卻到室溫，制得的納米金溶液在4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟二：吐溫60-納米金比色傳感器的合成：移取適量一定濃度的納米金溶液和一定濃度的吐溫60溶液按照一定的摩爾比進行混合，在室溫下，輕微振蕩2h，使吐溫60在溶液中分散均勻，再靜置10h，即得吐溫60修飾的納米金復合物；

步驟三：納米金比色傳感器測定條件的優(yōu)化：在0.2mol/LpH 7.5的PBS緩沖液，將標準活性的諾維信435脂肪酶加入到制備的吐溫60-納米金復合溶液中，在一定溫度條件下，反應一段時間，根據(jù)A650/A520比值實時檢測脂肪酶活性大小，得到檢測的最優(yōu)條件；

步驟四：建立不同活性脂肪酶的標準曲線：在得到檢測的最優(yōu)條件下，將不同活性的脂肪酶溶液加入到制備的吐溫60-納米金復合溶液中，在一定的反應條件下反應后，以吸光度比值A(chǔ)650/A520作為縱坐標，時間為橫坐標，繪制脂肪酶活的標準曲線；

步驟五：米糠樣品的實時檢測：將100g新鮮米糠，經(jīng)過碾米機碾磨30min后，得到分散均勻的米糠粉末，將得到的米糠粉末放置在空氣中自然干燥，將放置在空氣中的米糠粉末，每次間隔一定時間，稱取適量的米糠樣品，加入到含有吐溫60修飾的納米金復合物中反應一定時間，根據(jù)A650/A520比值實時檢測米糠中脂肪酶活性，得到檢測的最優(yōu)條件。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于步驟一將38mmol/L現(xiàn)配的檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)反應10min后停止加熱，溶液顏色由黃色逐漸變?yōu)橥该骶萍t色自然冷卻到室溫。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于步驟二將2.3nmol/L的納米金溶液和1.0μmol/L的吐溫60溶液按照1:50的摩爾比進行混合。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于步驟三將米糠中的脂肪酶加入到制備的吐溫60-納米金復合溶液中，在反應溫度50℃，反應10min，根據(jù)A650/A520比值實時檢測米糠中的脂肪酶活性。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于步驟四將不同活性的脂肪酶溶液加入到制備的吐溫60-納米金復合溶液中，在溫度為50℃的條件下反應10min后，再測定其吸光度比值。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米金比色法檢測米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于步驟五將放置在空氣中的米糠粉末，每次間隔2h，稱取5mg米糠樣品，加入到含有吐溫60修飾的納米金復合物中反應10min。