[發明專利]一種發酵液中衣康酸含量的測定方法

有效

• 申請號: 201811156905.2
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109061009B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 張居舟;程堅;李靜;汪永信;劉毅;張安;王璟秋
• 申請（專利權）人: 安徽省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 合肥市澤信專利代理事務所(普通合伙) 34144
• 代理人: 方榮肖

1.一種發酵液中衣康酸含量的測定方法，其特征在于，該測定方法具體步驟如下：

S1、試樣處理：

提取：取適量發酵液，離心處理后，稱取定量的上清液于容量瓶中，用甲醇-水溶液溶解，并定容；

凈化：取定量上述定容后的溶解液至固相萃取柱中，控制流速，棄去流出液，用甲醇-水溶液淋洗，再用磷酸-甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，置于氮吹管中，氮吹至干后，用磷酸溶液-甲醇溶液震蕩溶解殘渣，經有機微孔濾膜過濾，得到供高效液相色譜儀分析用的試樣溶液；

S2、標準溶液配制：

準確稱取衣康酸標準品，制成衣康酸標準儲備液，再精密量取衣康酸標準儲備液適量，配制成系列標準曲線工作溶液；

S3、儀器分析：

采用高效液相色譜儀，紫外檢測器測定，外標法定量；儀器分析的參考條件如下：色譜柱：Waters Bridge C18，250×4.6mm，5μm；流動相：0.1％磷酸溶液-甲醇溶液；流速：0.8mL/min；柱溫：45℃；進樣體積：5μL；檢測波長：210nm；

S4、結果計算：

將配制的標準曲線工作溶液，按濃度由低到高的順序進行檢測，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標作圖，繪制標準曲線；工作曲線的線性相關系數r²≥0.999，將凈化過濾后的試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到相應的峰高或峰面積，依據標準曲線得到待測液中衣康酸的濃度；

其中，所述步驟S1的具體操作步驟如下：

提?。喝∵m量發酵液，離心處理后，稱取上清液1.00g于100mL容量瓶中，用甲醇-水溶液溶解，并定容；

凈化：取1.00mL上述定容后的溶解液至固相萃取柱中，控制流速為0.5mL/min，棄去流出液，用1mL甲醇-水溶液淋洗，再用4mL的2％磷酸-甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，置于氮吹管中，50℃氮吹至干后，用1.00mL的0.1％磷酸溶液-甲醇溶液震蕩溶解殘渣，經0.45μm的有機微孔濾膜過濾，得到供高效液相色譜儀分析用的試樣溶液；

所述的固相萃取柱采用強陰離子固相萃取柱SAX，規格為：1000mg、6mL；使用前，依次用4mL甲醇、4mL水以及4mL甲醇-水溶液對強陰離子固相萃取柱進行活化處理；

所述的甲醇-水溶液中甲醇與水的體積比為1:1；

所述的2％磷酸-甲醇溶液是由體積比為1:50的磷酸和甲醇混合而成；

所述步驟S2的具體操作步驟如下：

精密稱取100mg的衣康酸標準品，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成含量為10.0mg/mL標準儲備液，于4℃下保存；再分別吸取適量衣康酸標準儲備液，用0.1％磷酸溶液-甲醇溶液配制成5、10、20、50、100、200mg/L的標準曲線工作溶液，于4℃保存，現用現配；

所述的0.1％磷酸溶液-甲醇溶液是由體積比為87:13的0.1％磷酸溶液和甲醇混合而成，其中，0.1％磷酸溶液是由體積比為1:1000的磷酸和水混合而成。