[發明專利]一種MRFFT1細胞

有效

• 申請號: 201811153232.5
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109136278B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 焦順昌;張嶸;周子珊;宋玉潔;解佳森;張天賦;王海燕;袁翰
• 申請（專利權）人: 北京鼎成肽源生物技術有限公司;焦順昌
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N5/10
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 郭曉迪

1.一種MRFFT1細胞，其特征在于，所述MRFFT1細胞由以下步驟制備：1)使用腫瘤患者的人源外周血進行ctDNA測序或腫瘤組織進行全外顯子測序，篩選出突變位點；2)根據突變位點進行抗原表位預測，合成突變多肽的基因序列；3)構建表達突變多肽的MVA病毒載體，包裝MVA病毒；4)轉染抗原遞呈細胞并與PBMC共培養，獲得MFF細胞；5)所述突變多肽作為抗原刺激所述MFF細胞，篩選出有效的精準多肽；所述精準多肽評判標準：設置陽性對照：T細胞+100ng/mL OKT3；陰性對照：T細胞+1640+10％FBS+200U/mLIL2；a.陽性對照和陰性對照正常，則說明此數據可信；b.實驗組IFN-γ的釋放量顯著大于陰性對照組的為有效的精準多肽；6)以所述精準多肽作為抗原刺激所述MFF細胞，篩選出能夠識別所述精準多肽的特異性細胞，測序并得到特異性細胞的高頻TCR基因；7)敲除外周血T細胞中原有的TCR基因，轉入上步獲得的能夠與精準多肽特異性結合的TCR基因，獲得TCR-T細胞；8)敲除細胞表面免疫抑制性信號分子，即得MRFFT1細胞。

2.如權利要求1所述的MRFFT1細胞，其特征在于，所述腫瘤患者的人源外周血采用市售工程細胞系替代。

3.如權利要求1所述的MRFFT1細胞，其特征在于，所述抗原表位預測是以突變的氨基酸位點為中心，向兩側各延伸8個氨基酸，將這段17個氨基酸的多肽作為潛在抗原表位；使用預測軟件分析潛在抗原表位的IC50，IC50＜1000nM則認為此潛在抗原表位為抗原表位。

4.如權利要求1所述的MRFFT1細胞，其特征在于，所述敲除外周血T細胞中原有的TCR基因和/或細胞表面免疫抑制性信號分子的方法為CRISPR技術。

5.如權利要求1所述的MRFFT1細胞，其特征在于，所述細胞表面抑制性信號分子包括：PD-1、Tim-3、LAG3、CTLA-4、BTLA、VISTA、CD160、2B4(CD244)。

6.如權利要求1所述的MRFFT1細胞，其特征在于，所述抗原遞呈細胞包括：外周血單個核細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞、B淋巴細胞、巨噬細胞。