[發明專利]一種分子標記鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法

有效

• 申請號: 201811149614.0
• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN109374715B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 程文;趙蘇嫻;王志武;盧增斌;丁照華;肖煥英;沈丹丹
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院玉米研究所（山東省農業科學院玉米工程技術研究中心）
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 劉乃東

本發明公開了一種分子標記多態性鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法，包括一下步驟：1)26％聚丙烯酰胺母液制備及貯存；2)1.5M的Tris?HCl(pH 8.8)配制及貯存；3)10％g/ml的APS的配制及貯存；4)聚丙烯酰胺凝膠工作液制備及貯存；5)使用前在聚丙烯酰胺凝膠工作液中加入10％APS和TEMED得到混合物，所述聚丙烯酰胺凝膠工作液、10％APS以及TEMED的比例為30ml：200μL：50μL；6)進行電泳。本發明工藝簡單、效率高，聚丙烯酰胺凝膠穩定性高，工作液能夠長時間儲存，將會大大節省藥品成本，提高制膠效率，極大地確保分子標記鑒定的簡易型和穩定性，為分子標記的多態性鑒定提供保障；同時利用本發明能夠提高實驗的精度和準確性，降低實驗成本和實驗人員工作量。

技術領域

本發明涉及分子標記鑒定技術領域，尤其涉及一種簡單、穩定、耐貯存的分子標記鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法。

背景技術

分子標記的鑒定是分子標記輔助選擇、品種純度篩選、基因克隆中最簡便和常用的方法。目前，常用的分子標記有AFLP、RFLP、SSR、SNP以及Indel等。上述分子標記中，除SNP分子標記可通過熒光定量PCR儀根據熔解曲線鑒定之外，其他分子標記的鑒定幾乎都依賴于聚丙烯凝膠電泳。在現有技術的實際實驗中，由于熔解曲線鑒定SNP所需要的試劑耗材費用較高，一般情況下采用CAPS或dCAPS進行SNP分子標記的鑒定，同樣依賴于電泳分離。因此，聚丙烯酰胺凝膠電泳在分子標記的鑒定中極其重要。

現有技術的分子標記的鑒定所用的聚丙烯酰胺凝膠制做存在著以下的問題：膠濃度不合適導致電泳分離不好，存在電泳條帶彌散的現象，制膠過程復雜，工作液不能長期儲存等，影響了實驗的精度和準確性，增加了實驗成本和實驗人員工作量。因此，創制一種簡單、穩定的聚丙烯酰胺凝膠制備技術體系，將會大大節省藥品成本，提高制膠效率，為分子標記的多態性鑒定提供保障。

發明內容

本發明的目的就是為了解決現有技術存在的上述問題，提供一種分子標記鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法。本發明工藝簡單、效率高，聚丙烯酰胺凝膠穩定性高，工作液能夠長時間儲存，將會大大節省藥品成本，提高制膠效率，極大地確保分子標記鑒定的簡易型和穩定性，為分子標記的多態性鑒定提供保障；同時利用本發明能夠提高實驗的精度和準確性，降低實驗成本和實驗人員工作量。

本發明所采用的技術方案為：

一種分子標記多態性鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法，包括以下步驟：

1)26％聚丙烯酰胺母液制備及貯存；

2)1.5M的Tris-HCl(pH 8.8)配制及貯存；

3)10％g/ml的APS的配制及貯存；

4)聚丙烯酰胺凝膠工作液制備及貯存；

5)使用前在聚丙烯酰胺凝膠工作液中加入10％APS和TEMED得到混合物，所述聚丙烯酰胺凝膠工作液、10％APS以及TEMED的比例為30ml:200μL:50μL；

6)進行電泳。

所述步驟1)稱量8g的甲叉雙丙烯酰胺，加入到2000ml的燒杯燒杯底部，稱量252g丙烯酰胺單體加入到燒杯中，加入600ml的水，攪拌直至完全溶解，最后在量筒中定容至1000ml，避光在4℃條件下保存。

所述步驟2)在另一個燒杯里加入磁棒，將燒杯置于攪拌儀器上，稱取181.5g的Tris放入燒杯，燒杯中加入800ml水并攪拌，加入濃鹽酸，用PH計調節PH至8.8，形成Tris-HCl(pH 8.8)液。

所述Tris-HCl(pH 8.8)液在高溫高壓滅菌后，在4℃條件下保存。

所述步驟3)中10％g/ml的APS通過稱取1g過硫酸銨定容至10ml得到，APS在4℃條件下保存。