[發明專利]一種分子標記鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法有效
| 申請號： | 201811149614.0 | 申請日： | 2018-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN109374715B | 公開（公告）日： | 2020-12-29 |
| 發明（設計）人： | 程文;趙蘇嫻;王志武;盧增斌;丁照華;肖煥英;沈丹丹 | 申請（專利權）人： | 山東省農業科學院玉米研究所（山東省農業科學院玉米工程技術研究中心） |
| 主分類號： | G01N27/447 | 分類號： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105 | 代理人： | 劉乃東 |
| 地址： | 250100 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 分子 標記 鑒定 聚丙烯酰胺 凝膠 制備 方法 | ||
1.一種分子標記多態性鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法，其特征是，包括以下步驟：
1)26％聚丙烯酰胺母液制備及貯存；
2)1.5M的Tris-HCl pH8.8配制及貯存；
3)10％g/ml的APS的配制及貯存；
4)聚丙烯酰胺凝膠工作液制備及貯存；
5)使用前在聚丙烯酰胺凝膠工作液中加入10％APS和TEMED得到混合物，所述聚丙烯酰胺凝膠工作液、10％APS以及TEMED的比例為30ml：200μL：50μL；
6)進行電泳；
所述步驟1)稱量8g的甲叉雙丙烯酰胺，加入到2000ml的燒杯底部，稱量252g丙烯酰胺單體加入到燒杯中，加入600ml的水，攪拌直至完全溶解，最后在量筒中定容至1000ml，避光在4℃條件下保存；
所述步驟2)在另一個燒杯里加入磁棒，將燒杯置于攪拌儀器上，稱取181.5g的Tris放入燒杯，燒杯中加入800ml水并攪拌，加入濃鹽酸，用p H計調節p H至8.8，形成Tris-HClpH8.8液；
所述步驟4)將26％聚丙烯酰胺母液、1.5M的Tris-HCl pH 8.8以及純水按1:1:1等體積混勻，得到可凝膠，可凝膠避光在4℃條件下保存。
2.如權利要求1所述的一種分子標記多態性鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法，其特征是，所述Tris-HCl pH 8.8液在高溫高壓滅菌后，在4℃條件下保存。
3.如權利要求1所述的一種分子標記多態性鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法，其特征是，所述步驟3)中10％g/ml的APS通過稱取1g過硫酸銨定容至10ml得到，APS在4℃條件下保存。
4.如權利要求1所述的一種分子標記多態性鑒定用聚丙烯酰胺凝膠制備方法，其特征是，所述步驟5)在室溫條件下，混合物經過10～30min得到可凝膠。
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