[發明專利]甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向異構體的高壓液相定量檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201811148975.3
• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN109115934A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 高穎;趙富虎;張鳳鳳;朱志賢;李向陽
• 申請（專利權）人: 甘肅泛植制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 陶濤

本發明公開了甘草次酸硬脂基酯中18α?和18β?差向異構體的高壓液相定量檢測方法及其應用，屬于差向異構體檢測技術領域。本發明是以苯基己基鍵合硅膠為固定相，通過以下色譜條件進行18α?甘草次酸硬脂基酯和18β?甘草次酸硬脂基酯的面積歸一化法定量檢測：流動相：乙腈:醋酸銨溶液=10?25:75?90；洗脫模式：等度洗脫；柱溫：33?38℃；檢測波長：226?280nm。本發明提供的方法可以將甘草次酸硬脂基酯中的18α?和18β?甘草酸異構體的高效分離，并進行面積歸一化法定量檢測，分離度滿足要求，檢測靈敏度高；且本發明可實現甘草次酸硬脂基酯樣品中18α?差向異構體的含量監測，可在甘草次酸硬脂基酯生產過程中的雜質監測和產品質量控制中廣泛應用。

技術領域

本發明涉及差向異構體檢測技術領域，涉及一種18α-和18β-甘草次酸硬脂基酯的定量檢測方法，具體涉及甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向異構體的高壓液相色譜定量檢測方法及其應用。

背景技術

甘草次酸硬脂基酯又稱甘草次酸十八酯、硬脂醇甘草亭酸酯，具有美白，抗氧化作用，常用于化妝品中。與甘草次酸相比，甘草次酸硬脂基酯由于分子中導入了親油性的高級烷烴的分子結構，可與多種油脂及高級醇相溶，配伍性好，且對皮膚的殺菌、消炎作用比甘草次酸提高50%以上。甘草次酸硬脂基酯是由甘草次酸和十八烷醇發生酯化反應合成的，而甘草次酸是以甘草酸為反應起始物，經水解生成的。甘草酸由于其三萜皂苷母核中的18位手性碳原子（C-18）構型不同，存在著18α-和18β-差向異構體。自然界中甘草酸的存在形式主要為18β-甘草酸，同時也存在少量18α-甘草酸（小于5%）。另外，由于甘草次酸硬脂基酯的合成過程是在較高的溫度及酸或堿的催化反應進行的，勢必會有部分的18β-甘草酸或18β-甘草次酸發生異構化。因此，以甘草酸為反應起始物合成的甘草次酸硬脂基酯存在著18α-和18β-差向異構體。而甘草次酸硬脂基酯作為化妝品原料，對皮膚起殺菌、消炎作用的主要是18β-甘草次酸硬脂基酯。為了提高甘草次酸硬脂基酯中18β-甘草次酸硬脂基酯的含量，通常利用兩種異構體在不同溶劑中溶解性不同的特點，經過多次重結晶除去甘草次酸硬脂基酯中的18α-甘草次酸硬脂基酯。

迄今為止，尚無甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向異構體的定量檢測方法。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述技術問題，提供一種簡單、高效的甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向異構體的高壓液相色譜定量檢測方法。

本發明的另一目的是提供上述甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向異構體的高壓液相色譜定量檢測方法的應用。

一、18α-甘草次酸硬脂基酯的制備

文獻記載，18α-甘草次酸的旋光度為 140～150°（光學異構體18α-甘草次酸制備方法研究，《新疆醫科大學報》，2012,35（2）：134-137），本發明所采用的18α-甘草次酸標準品（阿拉丁購買）的旋光度為 146.1°；利用該標準品采用高壓液相色譜法測得市售18α-甘草次酸的純度為98%（面積歸一法）。利用文獻（JP 53063368）方法，以上述純度≥98 %的市售18α-甘草次酸為原料，三乙胺為催化劑，加入溴代十八烷，正丁醇作為反應溶劑。常壓下，加熱回流，使得18α-甘草次酸與溴代十八烷發生較為完全的酯化反應，然后在乙醇中結晶、分離干燥后得到18α-甘草次酸硬脂基酯。該18α-甘草次酸硬脂基酯經旋光儀測得旋光度為111.1°，經質譜分析分子量為723.18，經元素分析含C元素79.63%（理論值為79.72%）、H元素11.26%（理論值為11.43%）。HR-ESI-MS結果：M/Z=723.6286[M+H]⁺（理論值723.6291），測試條件： Thermo Orbitrap Elite高分辨質譜儀，噴霧氣：3arb，反吹氣：1arb，毛細管電壓：3.5Kv，離子源溫度：275度。

二、甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向異構體的高壓液相色譜檢測