[發明專利]一種捕獲特定微量細胞的裝置及其制作和使用方法

有效

• 申請號: 201811146552.8
• 申請日: 2018-09-28
• 公開（公告）號: CN109517722B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 張珝;陳永麗
• 申請（專利權）人: 德拜至臻醫學科技（杭州）有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;宋靜娜

本發明公開了一種捕獲特定微量細胞的裝置和該裝置的制作及使用方法，該裝置包括磁珠，連接核酸，含多拷貝適配體的長鏈核酸；磁珠通過親和素?生物素的結合方式或生物素?鏈霉親和素將連接核酸固定在磁珠上，連接核酸由重復序列的天然或化學修飾的核苷酸組成，其作用為連接磁珠和含多拷貝適配體的長鏈核酸，所述含多拷貝適配體的長鏈核酸是由多個單價核酸適配體和與連接核酸互補的間隔序列組成，具有捕獲特定細胞的作用。相較于現用的微量細胞捕獲方法，本發明裝置操作簡單，成本低，可重復利用；捕獲細胞能力強，靈敏度，效率和純度方面明顯提高；靈活性強，所捕獲的細胞能從磁珠上釋放，且對細胞無損傷，可進行再培養和后續的細胞生物學實驗。

技術領域

本發明涉及細胞捕獲技術領域，具體來說，涉及一種捕獲特定微量細胞的裝置和該裝置的制作和使用方法。

背景技術

微量細胞的傳統分離方法是流式細胞術和熒光激活細胞分離術(Fluorescenceactivated cell sorting,FACS)，這種基于熒光探針標記抗體來捕獲CTCs的方法具有成本高，操作復雜，耗費時間長等缺點，在臨床應用上受到了較大的限制。強生公司的Cell-Search系統是最早應用于循環腫瘤細胞分離的設備，也是目前唯一獲FDA批準應用于臨床的循環腫瘤細胞檢測設備。但是，這種基于免疫磁珠捕獲的方法具有成本高、準確性差，靈敏度較低的缺點，在臨床上的推廣和應用受到了較大的爭議。因此，如何提高極微量的特異細胞的捕獲和富集的純度和靈敏度是如今面臨的最大挑戰之一。與抗體相比，核酸適配體與靶標結合具有很高的親和力，可以提高檢測的靈敏度，并具有熱穩定性好，無免疫原性，容易進行化學修飾，成本低，靈活性強的優勢，因此近年來大量應用于腫瘤診斷的設計和細胞捕獲的應用中。但基于核酸適配體的捕獲效率，以及核酸適配體與磁珠(或其它基質)結合后的空間位阻問題仍然是現今階段中迫切需要解決的問題之一。專利CN102719353 B公開了一種用于外周血中循環癌細胞的特異性捕獲的裝置及方法，該專利的核酸適配體固定可一次性完成，可以實現對目標癌細胞高選擇性和高特異性的捕獲；但該專利捕獲方法需要額外的儀器設備，在操作中可能對細胞有一定損傷；專利201611122625.0公開了一種高效捕獲細胞的方法，其包括磁珠的活化、磁珠的修飾、免疫磁珠的制備以及特定細胞的捕獲與分離富集，其通過使用特定的長鏈化合物進行修飾，形成的長鏈復合物具有立體網狀結構，增加了抗體和細胞結合的效率，該專利通過增加鏈長，從而減少空間位阻，來增加細胞捕獲的效率，但其需要在磁珠-長鏈化合物偶聯抗體，通過抗體與特定細胞表面的抗原發生反應，從而實現對特定細胞的捕獲，但該種方法成本高、準確性差，靈敏度較低、靈活性不夠強；專利201710739689.3公開了一種肺癌腫瘤細胞捕獲與活性檢測、分析方法及其應用，其采用負向富集肺癌CTCs的基礎上，通過對肺癌CTCs的捕獲，捕獲在濾膜上，通過聯合檢測細胞核形態與三種特定的mRNAs的表達量來識別肺癌CTCs，并對每例血液樣本中捕獲的疑似CTCs進行細胞核大小和形態學特征分析，結合TTF1 mRNA和pan-CK mRNA鑒別是否為TTF1陽性肺癌CTCs，進而依據MKI67 mRNA表達是否陽性將其歸類為有增殖活性的TTF1陽性肺癌CTCs或無增殖活性的TTF1陽性肺癌CTCs。該方法操作復雜，耗費時間長，且捕獲的純度沒法保證。

因此，急需研究出一種操作簡單、靈活性和效率高的特定細胞捕獲裝置。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足之處，本發明提供一種捕獲特定微量細胞的裝置和該裝置的制作方法，該裝置制作方法簡單，成本低，可重復多次使用；該裝置提高細胞捕獲的靈敏度和效率，提高靈活性，使捕獲后的細胞能夠重新釋放出來進行后續應用。

為實現上述目的，所采取的技術方案：

一種捕獲特定微量細胞的裝置，包括磁珠、連接核酸、含多拷貝適配體的長鏈核酸；所述連接核酸一端固定在磁珠表面，另一端以堿基互補的形式連接含多拷貝適配體的長鏈核酸，所述連接核酸由天然或化學修飾的核苷酸組成，所述含多拷貝適配體的長鏈核酸是由多個單價核酸適配體和與連接核酸互補的間隔序列組成的單鏈核酸。