[發(fā)明專利]一種龍膽提取物中龍膽苦苷的快速制備方法

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• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN110964069A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設計）人: 梁鑫淼;郭秀潔;王超然;郭志謀;高振華;徐欣華;匡海華
• 申請（專利權(quán)）人: 泰州醫(yī)藥城國科化物生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H1/08
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 李開婧

本專利涉及一種龍膽提取物中龍膽苦苷的快速制備方法。具體的講是一種將膜分離技術與高效制備液相色譜技術相結(jié)合，低能耗，環(huán)境友好型的綠色制造工藝路線。具體工藝步驟為：（1）龍膽藥材用水提取；（2）水提物膜澄清過濾；（3）膜后澄清液上樣到反相制備液相色譜柱，進行制備；（4）離子交換色譜脫色；（5）冷凍干燥。本發(fā)明所述方法完全使用醇水系統(tǒng)進行提取和分離，并且色譜填料均可重復利用，降低了生產(chǎn)成本。使用本發(fā)明工藝，終產(chǎn)物龍膽苦苷的含量可達99%以上。本工藝簡單、高效，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

技術領域

本發(fā)明涉及中醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種龍膽提取物中龍膽苦苷的快速制備方法。

背景技術

龍膽苦苷屬于裂環(huán)烯醚萜苷類化合物的一種，分子式為C₁₆H₂₀O₉，有保肝、利膽、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，在眾多龍膽科龍膽屬植物如秦艽、龍膽、肝炎草、麻花艽等中都有較高的含量，也是這些藥用植物的主要活性成分和指標成分。如2005版中國藥典就把龍膽苦苷定為龍膽和秦艽HPLC方法含量測定的指標成分，規(guī)定龍膽中龍膽苦苷的含量不得低于1.0%，在隨后的2010和2015版藥典中，該成分含量要求進一步提升到了不得低于3.0%。龍膽苦苷同時還是龍膽及其制品指紋圖譜的標志性成分。因此高純度龍膽苦苷對照品和藥用原料用途廣泛，需求量大。

目前報道的龍膽苦苷的分離提純方法主要采用如下步驟：藥材提取-柱層析富集和精制-結(jié)晶，不同提取分離過程的區(qū)別在于提取所用方法及柱層析所用分離材料不同。劉東鋒等（中國專利CN101704865A）采用超臨界流體提取，大孔樹脂分離，結(jié)晶的方法從條葉龍膽中獲得HPLC純度大于98%的龍膽苦苷標準品；朱吉滿等（中國專利103848875A）采用水提取、大孔樹脂，硅膠柱分離，結(jié)晶的方法從秦艽中獲得純度大于99%的龍膽苦苷，并將馬錢酸含量控制在0.5%以內(nèi)；段文錄等（中國專利CN 102675386A）采用硅膠柱選擇性的收集餾分得到純度98%以上的龍膽苦苷化合物；

以上方法均在不同程度上應用了大孔樹脂，硅膠柱層析及結(jié)晶的方法，雖然能獲得純度較高的龍膽苦苷純品，但是分離過程中損失非常大，收率較低，且需要用到揮發(fā)性較強的正相有機溶劑，易對操作人員造成較大傷害，同時大孔樹脂和硅膠柱層析都存在生產(chǎn)穩(wěn)定性較差和周期較長的缺點。

為此，提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出了一種從龍膽藥材中快速分離提純得到龍膽苦苷對照品或原料藥的新方法，其特征在于包括下面幾個步驟：

1. 水提：取龍膽藥材，加入其質(zhì)量5-20倍的蒸餾水或去離子水在60-100℃下提取1-3次，每次0.5-3 h，過濾、合并濾液，即得龍膽提取液，其中優(yōu)選8-10倍量水提取2-3次，每次0.5-1 h。

2. 膜澄清過濾：龍膽水提取液過100-500 nm孔徑的陶瓷膜或5-750KD孔徑的中空纖維膜進行微濾澄清，截留不溶性顆粒和大分子，收集澄清后的透過液。

3.反相制備色譜分離：將微濾澄清液直接大體積上樣到極性修飾的耐水性C18，C8或C4反相色譜柱，填料粒徑為5-60 μm；色譜柱內(nèi)徑為10-1000 mm。流動相為乙醇水或甲醇水，采用梯度或臺階洗脫，根據(jù)液相檢測結(jié)果，收集合并目標物餾分。

4. 凝膠脫色：將目標物餾分經(jīng)過陰離子交換填料脫色，收集無色流穿液，色素被吸附于填料柱頭，觀察填料顏色是否飽和以判斷脫色步驟上樣體積，優(yōu)選顏色層不超過凝膠柱2/3~3/4體積，然后用水頂洗0.5~2個體積，以使目標樣品盡量回收，凝膠柱經(jīng)堿洗、酸洗恢復正常。流穿液經(jīng)減壓濃縮后，采用冷凍干燥、真空干燥或噴霧干燥等方式進行干燥，得到白色的高純龍膽苦苷產(chǎn)品。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有以下優(yōu)點：

1. 本發(fā)明工藝簡單連貫，穩(wěn)定性好，適合規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)。