[發明專利]一種磁珠法提取DNA的試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 201811143843.1
• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN109182331A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 柏錦程;張振
• 申請（專利權）人: 江蘇齊耀生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 任立

本發明專利公布了一種磁珠法提取DNA的試劑盒及提取方法，試劑盒包括消化裂解體系、結合體系、漂洗體系、洗脫體系四大體系。試劑盒提取方法包括：樣品勻漿、細胞裂解、離心、DNA與磁珠結合、洗滌、DNA洗脫。本發明益處在于：(1)避免了復雜的液體處理過程，將整體的操作時間縮短了20min以上，使提取過程更為快捷；(2)磁珠轉移過程中無液體殘留，洗脫效率和PCR反應的成功率更高；(3)操作過程中，磁棒套可以多次使用，提高了耗材的效率，成本降低30％以上。

技術領域

本發明涉及一種提取DNA領域，尤其涉及一種磁珠法提取DNA的試劑盒及提取方法。

背景技術

自從1980年第一臺臨床研究自動化樣本處理裝置被投入使用以來，越來越多的實驗室自動化系統為解決實驗室面臨的挑戰提供了機遇。由于具備快速、準確和重復可靠性強的工作能力，自動化系統的使用能夠大大提高實驗室工作效率，帶來強大的高通量樣本處理能力。市場的需求推動實驗室自動化系統的快速發展，同時帶動了核酸提取技術和市場的不斷更新換代，在大趨勢下全自動核酸提取系統將逐步代替人工操作。目前，多家國外知名廠商的核酸提取系統占據市場主導地位，壟斷國內大部分市場，同時國產設備也在奮起直追，產品和技術都愈發成熟。整個國內市場，全自動微量DNA提取系統主要被QIAGEN、Hamilton以及Tecan等國外品牌所占據，其平臺成本高，提取速率慢，在實際使用過程中現有的全自動提取平臺往往無法應對突發緊急案件，從而成為實驗室的雞肋。

DNA技術在法醫物證領域起到越來越重要作用的同時，DNA提取系統也已經成為當今法醫實驗室必不可少的實驗設施。當前實驗室核酸提取系統多采用手工法或者半自動式，繁瑣復雜，不但延遲了偵破案件的時間，也影響了案件的偵破效率，越來越成為制約案件偵破的瓶頸，導致一線工作人員對全自動處理系統的需求越來越急切。而成本低、效率高的全自動微量DNA提取工作平臺成了大勢所趨。

本發明提供的DNA提取方法包括檢材消化裂解、離心、結合、漂洗、洗脫等程序，實現全過程的自動化、一鍵式操作，可以實現低成本、高效、快速的DNA提取過程，為犯罪嫌疑人的排查和案件的偵破提供最有效的幫助。

發明內容

針對傳統方案的不足和缺點，本發明提供一種磁珠法提取DNA的試劑盒及提取方法，能夠克服傳統方法的缺陷，從而達到高效率、低成本的目的。

一種磁珠法提取DNA的試劑盒，包括消化裂解體系、結合體系、漂洗體系、洗脫體系四大體系。

所述消化裂解體系包括消化緩沖液、蛋白酶、二硫蘇糖醇。

所述結合體系包括磁珠和結合液，所述磁珠為特定粒徑和表面修飾的超順磁性納米顆粒，所述結合液為磁珠吸附DNA提供高鹽低pH環境，使得DNA與磁珠表面羥基有效結合。

所述漂洗體系為乙醇溶液。

所述洗脫體系包括洗脫液。

試劑盒提取DNA的方法：首先進行消化裂解，使得DNA從細胞中游離出來，再離心去除載體和其他固體雜質，磁珠在結合液環境中吸附DNA，磁鐵吸附磁珠并棄去溶液，漂洗液洗去磁珠表面的可溶性雜質，洗脫液洗下磁珠吸附的DNA采用磁棒法的磁分離方式，通過特制的磁棒進行轉移磁珠的同時轉移樣品，磁珠定向聚集在磁棒表面套有的專門磁套上，通過磁棒套的運動來實現磁珠從樣本結合液到漂洗液，再到洗脫液的轉移，從而完成核酸的自動化提取過程。

所述試劑盒提取DNA方法的性能指標：

DNA回收率≥70％；

采用獨立離心機，最大離心力1000g；

磁珠回收率≥95％；

單次最大樣本處理量：48個樣本；

單次運行時間≤2h；

單個樣本最大處理體積：1300μl；