[發(fā)明專(zhuān)利]一種磁珠法提取DNA的試劑盒及提取方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811143843.1
• 申請(qǐng)日: 2018-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109182331A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 柏錦程;張振
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇齊耀生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 南京利豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 任立

1.一種磁珠法提取DNA的試劑盒，包括消化裂解體系、結(jié)合體系、漂洗體系、洗脫體系四大體系。

2.如權(quán)利要求1所述一種磁珠法提取DNA的試劑盒，其特征在于，所述消化裂解體系包括消化緩沖液、蛋白酶、二硫蘇糖醇。

3.如權(quán)利要求1所述一種磁珠法提取DNA的試劑盒，其特征在于，所述結(jié)合體系包括磁珠和結(jié)合液，所述磁珠為特定粒徑和表面修飾的超順磁性納米顆粒，所述結(jié)合液為磁珠吸附DNA提供高鹽低pH環(huán)境，使得DNA與磁珠表面羥基有效結(jié)合。

4.如權(quán)利要求1所述一種磁珠法提取DNA的試劑盒，其特征在于，所述漂洗體系為乙醇溶液。

5.如權(quán)利要求1所述一種磁珠法提取DNA的試劑盒，其特征在于，所述洗脫體系包括洗脫液。

6.一種磁珠法提取DNA的試劑盒提取方法，其特征在于，

(1)樣品勻漿：對(duì)消化緩沖液中化學(xué)試劑的種類(lèi)及配比，并充分震蕩搖勻，保證體系均勻，混合均勻后在室溫25攝氏度下靜置10分鐘；

(2)細(xì)胞裂解：將體系置于在50攝氏度的水浴中裂解20至30分鐘，并對(duì)體系持續(xù)震蕩，消化緩沖液、蛋白酶、二硫蘇糖醇為消化裂解過(guò)程提供緩沖條件，在消化裂解過(guò)程中DNA與蛋白質(zhì)分離，從細(xì)胞核中釋放出來(lái)；

(3)離心：采用獨(dú)立離心機(jī)，最大離心力為1000g，離心時(shí)間2至5分鐘，通過(guò)離心作用使得固液分離，去除載體和雜質(zhì)；

(4)DNA與磁珠結(jié)合：磁珠為特定粒徑和表面修飾的超順磁性納米顆粒，結(jié)合液為磁珠吸附DNA提供高鹽低pH環(huán)境，使得DNA與磁珠表面羥基有效結(jié)合，磁珠在結(jié)合液環(huán)境中吸附DNA，磁珠回收率穩(wěn)定在95％以上；

(5)洗滌：清洗磁珠表面的可溶性雜質(zhì)，主要洗滌包括鹽離子、蛋白質(zhì)以及抑制性雜質(zhì)，漂洗液的成分是乙醇溶液，洗滌次數(shù)為2次；

(6)DNA洗脫：加入25μl的洗脫液，混合均勻，在低鹽條件下洗脫磁珠表面結(jié)合的DNA，分離后可以收集純化的DNA，在零下20至零下80攝氏度的條件下保存，DNA回收效率穩(wěn)定在70％以上。