[發明專利]一種天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜指紋圖譜的構建方法及鑒別應用

有效

• 申請號: 201811142030.0
• 申請日: 2018-09-28
• 公開（公告）號: CN109470779B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 王華堂;趙紅霞;黃文忠;朱穎茵;張學鋒
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院動物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 胡素麗;劉明星

1.一種基于指紋圖譜技術區分天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜的方法，其特征在于，包括以下步驟：

一、構建天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜的指紋圖譜

(1)天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜中揮發性成分的萃取：將天然荔枝蜜樣品裝入頂空萃取瓶中，70℃保持10min后，利用固相微萃取于70℃條件下萃取50min；

(2)天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜中揮發性成分的分離檢測：步驟(1)萃取結束后，迅速將固相微萃取頭插入至氣相色譜-質譜儀的進樣口內解吸附5min進樣，氣相色譜條件為：色譜柱：HP-5MS色譜柱，進樣口溫度為250℃，不分流進樣，載氣為He；色譜柱的升溫程序為：起始溫度為50℃，保持3min；4℃/min升溫至130℃，保持5min；10℃/min升溫至250℃，保持3min；質譜條件為：接口溫度280℃，離子源：EI源，離子源溫度為230℃，四極桿溫度為150℃，電子倍增器電壓：70eV，全掃描模式，掃描質量范圍m/z 35-450amu；分別獲得天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜樣品的揮發性成分總離子流色譜圖；

(3)天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜揮發性成分指紋圖譜的構建：將天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜樣品的揮發性成分總離子流色譜圖分別導入至中藥指紋圖譜相似度評價系統，經過峰匹配得到共有峰，從而分別構建得到天然中蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜和天然意蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜；

(4)天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜揮發性成分中共有特征揮發性成分的確定：對步驟(3)中得到的天然中蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜和天然意蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜，采用質譜庫進行檢索分析，從而明確天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜中的共有特征揮發性成分；

所述的天然中蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜中的19種共有特征揮發性成分為：庚醛、1-庚醇、5-乙烯基-5-甲基-2(3H)-二氫呋喃酮、順式芳樟醇氧化物、反式芳樟醇氧化物、芳樟醇、脫氫芳樟醇、異佛爾酮、4-氧代異佛爾酮、紫丁香醛A、紫丁香醛C、2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫呋喃-3-醇、正壬醇、2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-2H-呋喃-3-醇、2,6-二甲基-3,7-辛二烯)-2,6-二醇、4-亞甲基異佛爾酮、2-羥基-3,5,5-三甲基-2-環己烯-1,4-二酮、乙酸苯乙酯、大馬士酮；所述的天然意蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜中的16種共有特征揮發性成分為：庚醛、5-乙烯基-5-甲基-2(3H)-二氫呋喃酮、順式芳樟醇氧化物、反式芳樟醇氧化物、芳樟醇、脫氫芳樟醇、異佛爾酮、4-氧代異佛爾酮、紫丁香醛A、紫丁香醛C、2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫呋喃-3-醇、2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-2H-呋喃-3-醇、2,6-二甲基-3,7-辛二烯)-2,6-二醇、4-亞甲基異佛爾酮、2-羥基-3,5,5-三甲基-2-環己烯-1,4-二酮、大馬士酮；

二、鑒定

如果待測天然荔枝蜜樣品的揮發性成分總離子流色譜圖與天然中蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜的相似度大于0.900，并同時含有天然中蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜中的19種共有特征揮發性成分，則判定為天然中蜂荔枝蜜；如果待測天然荔枝蜜樣品的揮發性成分總離子流色譜圖與天然意蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜的相似度大于0.900，并同時含有天然意蜂荔枝蜜的GC/MS指紋圖譜中的16種共有特征揮發性成分，且不含有1-庚醇、正壬醇和乙酸苯乙酯這3種特征揮發性成分，則判定為天然意蜂荔枝蜜。

2.權利要求1所述的基于指紋圖譜技術區分天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜的方法在天然中蜂荔枝蜜和天然意蜂荔枝蜜的區分鑒別中的應用。