[發(fā)明專利]靶向RyR2蛋白的胞內納米抗體在制備抗心力衰竭藥物中的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811131566.2
• 申請日: 2018-09-27
• 公開（公告）號: CN109306011B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設計）人: 胡適;李天;雷長海;傅文燕
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;A61K39/395;A61P9/04
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程技術領域，提供了一種靶向II型蘭尼堿受體(Ryanodine Receptor 2，RyR2)的納米抗體、編碼納米抗體的多核苷酸序列、包含其的載體和藥物及其用途。該靶向RyR2蛋白的納米抗體具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，編碼該納米抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，通過實驗驗證，靶向RyR2蛋白的納米抗體在小動物疾病模型中具有較高的表達水平，使得實驗動物左心室射血分數(shù)相比對照組存在不同程度的提高，同時能夠有效降低疾病動物模型心肌細胞RyR2磷酸化水平。因此，本發(fā)明的靶向RyR2蛋白的納米抗體能夠對心力衰竭起到有效的緩解和治療作用，可用于制備治療心力衰竭的藥物，具備廣闊的臨床應用前景。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程技術領域，具體涉及用于增強心肌細胞收縮力、靶向II型蘭尼堿受體(Ryanodine Receptor 2，RyR2)的納米抗體、編碼納米抗體的多核苷酸序列、包含其的載體和藥物及其用途。

背景技術

心力衰竭是大多數(shù)心臟疾病發(fā)展的終末階段，是人類發(fā)病率和死亡率最主要的原因之一，且在全世界范圍內，心力衰竭的發(fā)病率不斷的增加。目前的藥物治療雖然對控制心衰的疾病癥狀和致死率起到了一定作用，但是無法從根本上逆轉疾病發(fā)展，50％的心衰患者會在五年內死亡。

在細胞水平上，心力衰竭主要表現(xiàn)心肌細胞的收縮異常和節(jié)律異常。21世紀以來，科研人員對心衰中細胞及分子機制的認識有了長足的進步，但針對其中許多關鍵靶點的藥物開發(fā)相對困難緩慢，甚至存在無法直接干預的可能性，因此，基因治療就成為一種新的有效手段。科學技術的進步和大量動物試驗中獲得的喜人的結果為基因轉導心肌細胞遏制人類心衰疾病的發(fā)展打下良好的基礎，最新的介入手段和載體技術大大提高了心衰疾病基因治療的可能。

心肌細胞的鈣循環(huán)和鈣穩(wěn)態(tài)由多個關鍵蛋白質維持，鈣循環(huán)的紊亂可以導致多種肌細胞病理過程，如心功能不全、收縮性心室功能障礙、心律失常、心力衰竭、心源性休克、心肌梗死和心臟瓣膜功能障礙。心肌細胞肌漿網上的2型蘭尼堿受體(Ryanodine Receptor2，RyR2，UniProtKB編號：Q92736)是主要的鈣釋放通道，RyR2釋放的鈣離子數(shù)量決定了鈣瞬變的幅度，心肌細胞收縮的能力又取決于鈣瞬變的幅度。在心力衰竭這個病理狀態(tài)過程中，前期研究結果顯示，在心衰患者和疾病動物模型中都可以觀察到RyR2特定位點的異常修飾，如RyR2第2808位絲氨酸殘基磷酸化，第2814位絲氨酸殘基磷酸化等(Wehrens X H T,Lehnart S E,Reiken S,et al.Ryanodine receptor/calcium release channel PKAphosphorylation:a critical mediator of heart failure progression[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2006,103(3):511-518；RespressJ L,van Oort R J,Li N,et al.Role of RyR2 phosphorylation at S2814 duringheart failure progression[J].Circulation research,2012:CIRCRESAHA.112.268094.)。一般認為RyR2特定位點的異常修飾后可以導致蛋白構象發(fā)生一定改變，致使通道開關蛋白FKBP12.6解離，增加了鈣離子通道打開的概率，每次釋放的鈣離子數(shù)量減少，從而增強了鈣泄露的病理過程。

因此，利用生物醫(yī)學手段減少心肌病理過程中的RyR2異常修飾是亟待解決的科學問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于，依托上述研究背景，提供一種新型增強心肌細胞收縮力的靶向II型蘭尼堿受體(Ryanodine Receptor 2，RyR2)的納米抗體、編碼納米抗體的多核苷酸序列、包含其的載體和藥物及其用途。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種靶向RyR2蛋白的納米抗體，該納米抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：