[發明專利]一種貓干擾素ω及其制備方法和在抗病毒中的應用

有效

• 申請號: 201811126498.0
• 申請日: 2018-09-26
• 公開（公告）號: CN109206502B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 徐義剛;王紫微;王麗;范文祿;朱妍
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K14/555
• 分類號: C07K14/555;C12N15/20;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/21;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種貓干擾素ω，其特征在于，所述的貓干擾素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.編碼權利要求1所述的貓干擾素ω的核苷酸序列。

3.如權利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一種重組表達載體，其特征在于，含有權利要求2或3所述的核苷酸序列。

5.一種宿主細胞，其特征在于，含有權利要求4所述的重組表達載體。

6.權利要求1所述的貓干擾素ω在制備抗病毒藥物中的應用，其特征在于，所述的藥物用于治療或預防貓的病毒感染性疾病。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述的病毒包括貓腸道冠狀病毒和貓細小病毒。

8.一種制備權利要求1所述的貓干擾素ω的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)獲得編碼權利要求1所述的貓干擾素ω的核苷酸序列，并且在該序列的兩端連接Kpn I和BamH I酶切位點；

(2)重組表達載體pCold-TF-ω的構建

分別將表達載體pCold-TF及步驟(1)獲得的序列經限制性內切酶Kpn I和BamH I雙酶切處理，采用DNA膠回收試劑盒回收目的基因片段，進而將步驟(1)獲得的序列經T4連接酶連入表達載體pCold-TF，構建重組表達載體，命名為pCold-TF-ω；

(3)重組菌pCold-TF-ω/BL21的構建

將重組表達載體pCold-TF-ω轉化BL21感受態細胞，涂布于含有氨芐抗性的LB瓊脂平板進行培養，挑選陽性重組菌，命名為pCold-TF-ω/BL21；

(4)誘導表達

過夜涂板活化重組菌pCold-TF-ω/BL21，挑取單菌落接種于含濃度為100μg/ml氨芐的LB液體培養基中，37℃震蕩培養過夜；取新培養菌液按體積比1:10比例轉接至含氨芐抗性的LB液體培養基中，37℃培養至OD₆₀₀0.4-0.6時，加入終濃度為1mmol/L的IPTG，37℃誘導6h；取誘導后的重組菌液，離心，棄上清，加入PBS重懸菌體并進行超聲處理，然后加入5×SDS樣品裂解液，沸水浴10min，離心，取上清，將重組融合蛋白經His-tag標簽親和純化，再經HRV 3C蛋白酶處理及His-tag標簽親和純化，最終獲得所述的貓干擾素ω。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，編碼權利要求1所述的貓干擾素ω的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。