[發明專利]一種貓干擾素ω及其制備方法和在抗病毒中的應用

有效

• 申請號: 201811126498.0
• 申請日: 2018-09-26
• 公開（公告）號: CN109206502B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 徐義剛;王紫微;王麗;范文祿;朱妍
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K14/555
• 分類號: C07K14/555;C12N15/20;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/21;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種貓干擾素ω及其制備方法和在抗病毒中的應用。所述的貓干擾素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。優選的，編碼所述的貓干擾素ω的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。此外，本發明還公開了一種制備所述的貓干擾素ω的方法及其在制備抗病毒藥物中的應用。本發明采用病毒刺激(貓腸道冠狀病毒)結合干擾素誘生劑刺激(聚肌胞poly I:C)方法對寵物貓體進行刺激，進而誘導貓干擾素基因表達。然后通過PCR擴增得到了一條貓干擾素ω基因，細胞試驗顯示本發明獲得的一種貓干擾素ω具有明顯的抗病毒活性，并優于現有已知貓干擾素。本發明的提出為貓干擾素制品的進一步研發和應用奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及一種新型的貓干擾素ω及其制備方法和在抗病毒中的應用。本發明屬于獸藥技術領域。

背景技術

干擾素是機體受病毒感染時產生的一種抗病毒細胞因子，由被感染細胞釋放以抑制病毒的增殖，具有廣譜抗病毒和增強免疫應答的作用。現已確定的干擾素有兩大類：I型和II型。I型干擾素主要包括IFN-α、IFN-β和IFN-ω；II型干擾素主要有IFN-γ。目前，人用干擾素研究進展迅速，如基因工程重組人干擾素α已被廣泛用于人類病毒感染的治療，重組人干擾素ω也已用于SARS的治療。

近年來，我國寵物貓飼養量在增長迅速，已成為人們休閑生活一部分，而諸多病毒病卻嚴重危害著寵物貓的健康和生存。干擾素是治療病毒感染性疾病最為有效的治療藥物，而目前對貓干擾素的研究和臨床制劑的開發還相對滯后，同時已公布的貓干擾素序列也比較有限。

本發明公開了一種新型貓干擾素ω及其編碼基因序列，并通過基因工程方法制備了該新型貓干擾素以及進行了抗病毒活性測定，本發明為貓干擾素生物制品的研發提供了物質基礎。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型的貓干擾素ω及其制備方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明采用病毒刺激(貓腸道冠狀病毒)結合干擾素誘生劑刺激(聚肌胞poly I:C)方法對寵物貓體進行刺激，進而誘導貓干擾素基因表達。然后根據GenBank中已發布的貓干擾素ω基因序列，通過DNAMAN進行基因序列比對，使用Oligo6設計了一對簡并引物用以擴增貓干擾素ω基因，最終本發明獲得了一種新型的編碼貓干擾素ω的基因序列，通過測序及BLAST比對發現，其與已發布的貓干擾素ω基因序列同源性較高，屬于貓干擾素ω新成員，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明通過基因工程方法制備了該新型貓干擾素并對其進行了抗病毒活性測定，結果發現本發明的新型貓干擾素ω具有良好的抗病毒活性，有效抗病毒濃度為0.65mg/mL，優于已知貓干擾素，顯示了良好的應用潛力。

在上述研究的基礎上，本發明提出了一種新型的貓干擾素ω，所述的貓干擾素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

編碼所述貓干擾素ω的核苷酸序列、含有所述核苷酸序列的重組表達載體以及含有所述重組表達載體的宿主細胞也在本發明的保范圍之內。其中，優選的，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步的，本發明還提出了所述的貓干擾素ω在制備抗病毒藥物中的應用。

其中，優選的，所述的藥物用于治療或預防貓的病毒感染性疾病。

其中，優選的，所述的病毒包括貓腸道冠狀病毒和貓細小病毒。

更進一步的，本發明還提出了一種制備所述的貓干擾素ω的方法，包括以下步驟：

(1)獲得編碼所述貓干擾素ω的核苷酸序列，并且在該序列的兩端連接Kpn I和BamH I酶切位點；

(2)重組表達載體pCold-TF-ω的構建