[發明專利]用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用

在審

• 申請號: 201811121498.1
• 申請日: 2018-09-27
• 公開（公告）號: CN109055540A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 李培峰;李保偉;王建勛;劉英;郝曉丹;吳薇
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 舒暢

本發明提供了一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用，涉及基因工程技術領域，本發明提供的引物組，包括共用下游引物、等位基因特異引物和中間序列特異引物。本發明利用通用探針技術開發的針對CYP2C9rs1057910與VKORC1rs9923231位點的基因分型引物組，具有開發成本低，研發周期短，準確性高等特點，能夠滿足臨床檢測所需要的準確度、精密度及檢出率等要求。并且，該引物組具有特異性強，準確度高，DNA測定范圍廣的優點有利于推動針對該位點的華法林個體化用藥基因的臨床檢測。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其是涉及一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用。

背景技術

華法林是目前臨床上廣泛使用的香豆素類口服抗凝藥，已被應用于多種疾病的抗凝治療，如靜脈血栓栓塞性疾病(VTE)的一級和二級預防、心房顫動血栓栓塞的預防、瓣膜病、人工瓣膜置換術和心腔內血栓形成等，但臨床療效和不良反應個體差異很大，劑量很難掌握，尤其是在使用華法林抗凝治療初期，極易導致嚴重的出血并發癥。據估計，服用華法林的患者中，每年有15.2％的人發生出血副作用，其中致命性的大出血占3.5％，不同個體間華法林穩定劑量的差異可達20倍以上。大量研究表明，華法林代謝酶CYP2C9基因和靶點基因VKORC1基因遺傳多態性與其抗凝療效密切相關，不同基因型患者所需華法林劑量差異明顯。

其中，細胞色素P450酶2C9基因(CYP2C9)和維生素K環氧化物還原酶復合體亞單位1基因(VKORC1)多態性分別解釋約37％和6％的劑量差異。美國食品藥品監督管理局(FDA)于2007年8月修改華法林用藥標簽，提示基因型檢測有助于調整華法林給藥劑量。2009年美國FDA再次修改華法林用藥標簽，并根據患者VKORC1和CYP2C9基因型確定華法林起始劑量。國際華法林藥物基因組聯合會(IWPC)收集了5700例來自4大洲9個國家的21個研究機構使用華法林達到穩定臨床療效的患者信息，并建立數據庫。通過對此數據庫的篩選和驗證，建立了IWPC模型，是目前涉及病例規模最大的模型，該模型可解釋華法林個體劑量差異47％。實踐證明，依據患者基因型并結合患者臨床信息進行華法林個體化給藥，可明顯提高華法林抗凝達標率，降低抗凝并發癥，減少患者再住院率。因此，建議在使用華法林前進行CYP2C9和VKORC1基因檢測，依據患者基因型指導華法林給藥劑量。

因此，CYP2C9和VKORC1基因多態性檢測對于華法林用藥有重要意義。目前華法林代謝敏感型基因CYP2C9和VKORC1分型檢測常用方法為Taqman探針-qPCR法，該方法是利用位點特異性Taqman探針來完成基因分型檢測。然而，Taqman探針-qPCR方法具有開發成本高、周期長等缺點，使得基于該方法的臨床基因檢測成本較高，限制了基因檢測技術的臨床推廣。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的引物組，以緩解現有技術中存在的Taqman探針-qPCR檢測CYP2C9和VKORC1基因分型具有開發成本高、周期長的技術問題。

本發明的第二個目的在于提供一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的試劑。

本發明的第三個目的在于提供一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的試劑盒。

本發明的第四個目的在于提供一種CYP2C9和VKORC1基因分型的檢測方法，該方法工藝簡單，操作方便，檢測成本低，同時能夠滿足臨床檢測所需要的準確度、精密度及檢出率等要求。

本發明的第五個目的在于提供上述引物組或試劑或試劑盒在檢測個體對硝酸甘油藥物敏感性中的應用。