[發明專利]用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用

在審

• 申請號: 201811121498.1
• 申請日: 2018-09-27
• 公開（公告）號: CN109055540A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 李培峰;李保偉;王建勛;劉英;郝曉丹;吳薇
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 舒暢

1.一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的引物組，其特征在于，所述引物組包括CYP2C9共用下游引物、CYP2C9等位基因特異引物和CYP2C9中間序列特異引物；以及，VKORC1共用下游引物、VKORC1等位基因特異引物和VKORC1中間序列特異引物；

所述CYP2C9共用下游引物為CYP2C9-acR，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

所述CYP2C9等位基因特異引物包括CYP2C9-aF和CYP2C9-cF，所述CYP2C9-aF具有如SEQID NO.2所示的核苷酸序列，所述CYP2C9-cF具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

所述CYP2C9中間序列特異引物為CYP2C9-mid，具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

所述VKORC1共用下游引物為VKORC1-ctR，具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；

所述VKORC1等位基因特異引物包括VKORC1-cF和VKORC1-tF，所述VKORC1-cF具有如SEQID NO.6所示的核苷酸序列，所述VKORC1-tF具有如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；

所述VKORC1中間序列特異引物為VKORC1-mid，具有如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述CYP2C9等位基因特異引物CYP2C9-aF和CYP2C9-cF，分別含有通用引物序列和與通用探針反向互補的序列；

優選地，所述CYP2C9-aF含有與FAM通用探針反向互補的序列，FAM信號代表A基因型，所述CYP2C9-cF含有與HEX通用探針反向互補的序列，HEX信號代表C基因型；

優選地，所述VKORC1等位基因特異引物VKORC1-cF和VKORC1-tF，分別含有通用引物序列和與通用探針反向互補的序列；

優選地，所述VKORC1-cF含有與FAM通用探針反向互補的序列，FAM信號代表C基因型，所述VKORC1-tF含有與HEX通用探針反向互補的序列，HEX信號代表T基因型。

3.一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的試劑，其特征在于，所述試劑包括權利要求1或2所述的引物組。

4.一種用于檢測CYP2C9和VKORC1基因分型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1或2所述的引物組或權利要求3所述的試劑。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括2*PCR Mix、2*UP-qPCR Mix、Primer Mix、CYP2C9qPrimer Mix、VKORC1qPrimer Mix、ddH₂O、CYP2C9陽性標準品和VKORC1陽性標準品。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述Primer Mix包括CYP2C9-acR、CYP2C9-aF、CYP2C9-cF、VKORC1-ctR、VKORC1-cF與VKORC1-tF，溶劑為滅菌雙蒸水；

優選地，所述CYP2C9-acR、CYP2C9-aF、CYP2C9-cF、VKORC1-ctR、VKORC1-cF與VKORC1-tF的濃度均為1-3μM；

優選地，所述CYP2C9qPrimer Mix包括CYP2C9-mid，溶劑為滅菌雙蒸水；所述VKORC1qPrimer Mix包括VKORC1-mid，溶劑為滅菌雙蒸水；

優選地，所述CYP2C9-mid與VKORC1-mid的濃度均為5-10μM。

7.一種CYP2C9和VKORC1基因分型的檢測方法，其特征在于，應用權利要求1或2所述的引物組或權利要求3所述的試劑或權利要求4-6任一項所述的試劑盒。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，以待測樣本的DNA為模板，利用所述引物組進行實時熒光定量PCR反應，根據檢測到的熒光信號判定CYP2C9和VKORC1的基因型。