[發(fā)明專利]空間鄰近化學發(fā)光法檢測腫瘤壞死因子的試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811115053.2
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN109142334A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設計）人: 奚偉紅;廖鴛鴦;朱丹丹
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫壹閃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 向霞

本發(fā)明涉及一種空間鄰近化學發(fā)光法檢測腫瘤壞死因子的試劑盒及其檢測方法。試劑盒包括：酶標記物、發(fā)光標記物、輔助劑、觸發(fā)劑和校準品；其中，校準品包括不同濃度TNF?α抗原的校準品和0.1M磷酸鹽稀釋液；酶標記物包括過氧化物酶標記的TNF?α檢測抗體和0.05M磷酸鹽緩沖液；發(fā)光標記物包括9,10?二氫吖啶標記的TNF?α捕獲抗體和0.05M Tris緩沖液；輔助劑包括發(fā)光輔助劑和枸櫞酸鹽緩沖液。本發(fā)明采用試劑空間鄰近發(fā)光分析檢測技術(shù)，其作為一種真正意義上的均相化學發(fā)光技術(shù)，無需清洗、無需載體，沒有包被過程，檢測靈敏度高，特異性強，使得檢測結(jié)果更真實可信；同時優(yōu)化了反應時間和反應步驟，使操作更簡單。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領域，具體涉及一種空間鄰近化學發(fā)光法檢測腫瘤壞死因子的試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

1975年，E.A.Carswell等人發(fā)現(xiàn)接種卡介苗的小鼠注射細菌脂多糖后，血清中會出現(xiàn)一種能使多種腫瘤發(fā)生出血性壞死的物質(zhì)，并將其命名為腫瘤壞死因子(tumornecrosis factor，TNF)。八十年代人們發(fā)現(xiàn)其在消耗癥中起了重要作用，又稱惡液質(zhì)素。TNF主要由活化的巨噬細胞，NK細胞及T淋巴細胞產(chǎn)生。1985年Shalaby把巨噬細胞產(chǎn)生的TNF命名為TNF-α，把T淋巴細胞產(chǎn)生的淋巴毒素(lymphotoxin，LT)命名為TNF-β。雖然TNF-α與TNF-β僅有約30％的同源性，但它們卻擁有共同的受體。TNF-α的生物學活性占TNF總活性的70％～95％，因此目前常說的TNF多指TNF-α。

TNF-α由157個氨基酸組成，是一個跨膜蛋白，它可以被TACE酶切割成為可溶性的分子。血清TNF-α和IL-6含量的升高與妊娠期高血壓的病理生理過程密切相關。曲列尼爾能夠明顯降低妊娠高血壓小鼠體內(nèi)的TNF-α和IL-6的水平，能夠顯著抑制低氧誘導的妊娠高血壓的發(fā)病進程。因此，血清TNF-α和IL-6的水平可作為一種潛在的預測標志物來用于妊娠期高血壓的臨床診斷與治療。

在小兒急性腸套疊患兒中，TNF-α增高使腸道粘膜充血、水腫，持續(xù)增高可使腸道平滑肌痙攣、收縮，引起腸腔狹窄，為腸套疊的發(fā)生創(chuàng)造條件；同時，高濃度TNF-α可使單核細胞及血管內(nèi)皮細胞等分泌較大量白介素-1(IL-1)和IL-6，以放大細胞因子介導的炎癥作用，進一步加劇腸道粘膜的損害、加劇腸道平滑肌收縮。IL-6是Th2型細胞因子，在急性腸套疊患兒中，IL-6升高是免疫調(diào)節(jié)作用，抗炎，抗病毒的作用，同時對抗TNF-α的作用，但TNF-α升高優(yōu)勢于IL-6，致使腸道平滑肌持續(xù)收縮導致腸套疊的發(fā)生。急性腸套疊患兒血清中的TNF-α和IL-6水平明顯升高。

腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)在臨床研究中發(fā)現(xiàn)能引起血-視網(wǎng)膜屏障(blood retinal barrier，BRB)受損并協(xié)同VEGF的增殖。對糖尿病微血管病變患者血清TNF-α水平的測定表明血清TNF-α濃度的增高與糖尿病性微血管病變的發(fā)生與發(fā)展有著十分密切的關系。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明目的在于提供一種空間鄰近化學發(fā)光法檢測腫瘤壞死因子的試劑盒及其檢測方法。該法作為一種真正意義上的均相化學發(fā)光技術(shù)，無需載體，沒有包被、洗滌過程，試劑盒組分少，且靈敏度高、重復性好、操作簡單。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

第一方面，本發(fā)明提供一種腫瘤壞死因子-α的檢測試劑盒，試劑盒包括：酶標記物、發(fā)光標記物、輔助劑、觸發(fā)劑和校準品；其中，酶標記物的原料組分包括過氧化物酶標記的TNF-α檢測抗體，發(fā)光標記物的原料組分包括9,10-二氫吖啶標記的TNF-α捕獲抗體。